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羧基磁珠偶联缓冲液套装
PuriMag Buffer Kit for coupling of carboxyl bead
（Cat：PB0001）
1. 简介
羧基磁珠是常用的偶联载体，本试剂盒提供用于羧基与氨基的偶联所需的缓冲液，譬如羧基微珠偶联抗体、氨基修饰DNA等。
2. 试剂盒组成
缓冲液
体积
组成
注意
Coupling Buffer
（偶联缓冲液）
50 ml
50 mM MES, pH 6.0, 0.01% Triton X-100
Coupling Agent
（偶联试剂）
50mg×1
EDC；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer）
尽量现配现用，溶液保存不超过1个月
Sulfo-NHS；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer）
Quench Buffer
（淬灭缓冲液）
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer
（储存缓冲液）
10 ml
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20, 0.05%NaN3.
3. 两步偶联方案
本方案通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。本方案中涉及的偶联对象（蛋白、氨基修饰核酸、其它含伯氨基化合物）的使用量可根据需要进一步优化以达到最优偶联率。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于偶联。
2. 涡旋振荡重悬羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离并吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。混匀。
7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
9. 加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白或配体。涡旋混匀。室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架，磁分离吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如优化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。
购买羧基磁珠，请参考 http://www.purimagbead.com/Product/7196422517.html
