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一、概述
Magarose®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标，内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖（6％）交联而成，粒径10~30 μm，保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性，显著加速操作和实验的重现性。
TALON 琼脂糖磁珠（Magarose-TALON）针对纯化 His 标签蛋白而研制的一种新型四齿配体Co2+纯化介质，其显著特点是具有较好的特异性，可从低浓度样本中高效、快速、方便地一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域快速纯化His标签蛋白。
二、产品特性
产品名称
Magarose-TALON-Co
货号
PMAG001-4Co
磁珠浓度
25%（v/v）in 20% EtOH
配基
CMA
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
10 ~ 30μm
配体结合
20 ~ 40mg EGFP(27KD)/ml磁珠
保存
常温运输，2~8℃保存一年
三、使用方法
1. 推荐的缓冲液
A. 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方
Binding Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 5~20mM咪唑, pH7.0;
Wash Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 20~100mM咪唑, pH7.0;
Elution Buffer: 20mM PBS, 500mM NaCl, 300-500mM咪唑, pH7.0;
B. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方
Binding Buffer: 6M guanidine-HCl, 50mM NaH2PO4, 100mM Tris·HCl, pH7.0;
Wash Buffer: 6M guanidine-HCl, 50 mM NaH2PO4, 100 mM Tris·HCl, pH7.0;
Elution Buffer: 6M guanidine-HCl, 50 mM NaH2PO4, 100mM Tris·HCl, 300-500 mM 咪唑, pH7.0;
Note: Buffer 在使用前需 0.22或0.45 μm滤膜过滤除菌。推荐Buffer 体系适用于多数His标签蛋白的纯化，在 Binding Buffer 中添加一定浓度咪唑可降低非特异性结合，提高目的蛋白纯度。初次使用可采用推荐的缓冲液，再根据实验结果适当调整缓冲液中的咪唑浓度。
2. 样品准备
2.1组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌下非变性条件下可溶性表达）
稀释重组表达的蛋白：每克大肠杆菌菌体加入5~10 ml binding buffer重悬。样品和binding buffer含同样浓度的咪唑可避免宿主细胞表达的含组氨酸的蛋白。同时要去除大颗粒和高浓度的螯合剂，如EDTA，组氨酸、柠檬酸等杂质，防止破坏磁珠。
1. 酶解：0.2 mg/ml 溶菌酶，20 μg/ml DNase，1 mM MgCl2，1 mM PMSF（终浓度）或其他蛋白酶抑制剂。加入的抑制剂须对磁珠无影响，4°C混匀30min。
2. 机械裂解：超声，均质，反复冻融等。
3. 调整裂解液的pH到7.4：不要用强碱或酸调节pH（防止沉淀）。
4. 裂解液离心：将液体移至离心管，室温或4°C下12000 rpm离心20 min，温度选择根据蛋白稳定性。
5. 收集上清或收集离心后沉淀准备下一步实验。
6. 对于在酵母、昆虫及哺乳动物细胞系统中表达的蛋白，如有大量上清液可用硫酸铵进行蛋白沉淀。用1× PBS透析，加入到磁珠中，如样品不含EDTA、组氨酸、柠檬酸等影响磁珠成分，可直接纯化。
2.2组氨酸标签蛋白样品准备（在大肠杆菌中包涵体表达变性条件纯化）
1. 用1×PBS悬浮细胞（每ml细菌沉淀约5 ml 1× PBS），按照上面的超声条件进行实验。
2. 裂解液在12,000 rpm离心10 min收集包涵体。用1×PBS洗涤几次包涵体。
3. 用Binding/Wash buffer溶解包涵体（每ml包涵体约5 ml Buffer），并在室温下孵育30~60 min。可能需要均质或超声将沉淀完全溶解。
4. 12,000 rpm离心30 min去除不溶物。小心的将上清转移到干净的管中而不触碰下面的沉淀。
2.3组氨酸标签蛋白纯化步骤
磁珠使用量由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量计算获得，这里以0.5-1mg目标蛋白为例：
1. 磁珠准备：将TALON磁珠充分混匀，使用移液器取0.2 ml 的磁珠悬浮液，（磁珠沉降体积50μl）置于离心管中，磁分离，待溶液澄清，吸弃清液，加入ddH2O反复清洗，去除酒精。
2. 磁珠平衡：加入0.5 ml Binding Buffer，反复吹打5-10次，磁分离，吸弃清液，重复洗2次。
3. 磁珠与目的蛋白结合：用1 ml Binding Buffer悬浮0.2 g湿菌体，破胞后即为目的蛋白粗样，将粗蛋白加入磁珠，颠倒混匀。室温孵育15 min（如目标蛋白不稳定，2-8°C下孵育30 min）。
4. 洗杂：置离心管于磁分离器，移出上清液，保留以备取样检测。向离心管中加入1 ml Wash Buffer，吹打5-10次，磁分离，吸取上清液，保留以备检测。重复洗杂步骤3次以上。
5. 洗脱：用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度，加入0.2-1 ml Elution Buffer 加入到离心管中，重悬磁珠，磁分离，吸取上清液，即为目的蛋白组分。重复上述步骤多次，分别收集洗脱组分并留样检测，以提高目的蛋白回收量。
洗脱组分
洗脱体积
总蛋白回收比例
Eluate 1
50 μL
60%
Eluate 2
20%
Eluate 3
10%
Eluate 4
5%
6. 磁珠后处理：加入0.5 ml Elution Buffer，重悬磁珠，磁分离，吸弃上清，重复该步骤2次。再用5 ml ddH2O反复清洗3-5次。最后，加入2 ml 20%的乙醇溶液，使总体积等于初始磁珠悬浮液体积，保存于2-8°C。
7. SDS-PAGE检测：纯化样品SDS-PAGE 检测。
3. 故障排除指南（Troubleshooting Guide）
问题描述
可能原因
解决方案
使用过夜培养物时，蛋白无法结合到磁珠上
样品的 pH 不在适宜范围内
检测样品 pH，确保其处于 7–8 范围内。
磁珠无法向磁铁方向聚集/迁移
溶液黏度过高
1. 加足量 DNase I，使终浓度达1 U/mL 培养物，并加入磁珠前充分混匀。2. 使用5×Wash Buffer一步稀释样品，使体系中Wash Buffer 终浓度达到 1×
4．注意事项
1) 磁珠避免冷冻、干燥和高速离心；
2) 使用产品前务必充分振荡使磁珠均匀悬浮；
3) 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩混使磁珠充分重悬；
4) 用户可根据实际需要保留经磁分离移去的上清，进行检测分析；
5) 本产品重复使用时建议纯化同种蛋白，纯化不同蛋白时，建议使用新磁珠；
6) 本产品需与磁性分离器配套使用；
参考文献：
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