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近年来,在生命科学领域,为了进一步解析基因功能,蛋白质组学(Proteomics)和多肽组学(peptidomics)研究应运而生。蛋白质组学是在蛋白质层面讨论生命系统之现象,包括特定的细胞、组织、脏器中基因经转录转移而产生之全部蛋白质,可为疾病诊断、动植物育种和新药研发等领域所应用。基于飞速发展的质谱技术分析蛋白质,具有高效、快速、简单等显著特点,因而成为蛋白组学研究的重要工具。在质谱分析前,往往要对样本进行冗繁的前处理,达到浓缩富集目标蛋白的目的,再进行质谱分析。PuriMag磁珠法蛋白冠前处理试剂盒可以替代传统的蛋白质样本前处理手段用于蛋白组学样本前处理,作为快速解决这一问题的重要工具。PuriMag™ Promix Kit-001、Promix Kit-002、Promix Kit-003、Promix Kit-004、Promix Kit-005单独使用可获得2000-4000个蛋白。
PuriMag™ Promix Kit-001
Cat.
Particle Description
Material
Volume (ml)
Zeta potential (mV)
Pmix01001
Silica coated
SiO2
1 ml
-30 ~ -40
Pmix05003
Dimethylamine function
Polymer
20 ~ 30
Pmix05001
Carboxylated polystyrene
-25 ~ -30
Pmix04002
Hydroxyl HIC
-10 ~ -20
Pmix05006
Polyzwitterion coated HILIC
-20 ~ -30
混合使用时:Pmix01001(10μL)+Pmix05003(5μL)+Pmix05001(10μL)+ Pmix04002(5μL)+Pmix05006(10μL)
PuriMag™ Promix Kit-002
Pmix09002
MesoSi
Complex
PuriMag™ Promix Kit-003
Pmix01002
Amine
10 ~ 20
Pmix01003
Ethylenediamine-N-propyl
Pmix01004
Carboxyl
Pmix01006
Carboxy propyl
-40 ~ -50
混合使用时:Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01003(5μL)+Pmix01004(10μL)+ Pmix01006(10μL)
PuriMag™ Promix Kit-004
Pmix04003
Hydrophilic amine
Pmix04004
Hydrophilic carboxyl
混合使用时:Pmix04003(5μL)+Pmix04004(10 μL)+ Pmix01001(10μL)+Pmix01002(5μL)+ Pmix01004(10μL)
PuriMag™ Promix Kit-005
Amine modified
Carbonaceous complex
Pmix05004
Sulphate modified
混合使用时:Pmix05003(25 μL)+Pmix05004(25 μL)
缓冲液
0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4~8.0)
操作流程
样品准备
1. 血浆和血清样本用含0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4) 按1:5稀释。
磁珠准备
2. 磁性纳米粒子上下振荡摇匀,取50μL磁珠磁分离,去上清,加入100μL的TE 缓冲液,超声分散10 秒 。磁分离,去上清。再加入100μL的TE 缓冲液,超声分散10 秒分散 。
孵育
3. 为了形成蛋白冠,在上述100 μL 磁性纳米粒子悬液中加入 200 μL 稀释的样本,于37 °C下300 rpm振荡孵育1h。(注意:孵育时避免磁珠沉降)
收集磁珠
4. 孵育后,磁分离 5 min ,移去上清液。
洗涤磁珠
5. 用500 μL的TE 缓冲液洗涤磁珠3次,并磁分离去上清。(注意:尽量洗去表面高丰度蛋白)
酶解洗脱
6. 为了水解蛋白冠,采用胰蛋白酶试剂盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解缓冲液,并95 °C 搅拌加热 10 min 。冷却到室温后,加入胰蛋白酶消化液,37 °C 振荡孵育 3 h。加入终止液停止消化。磁分离,将上清液移到新管中。用过滤柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sμL fonate [SDB-RPS])过滤,使用75 μL 洗脱液洗脱多肽2次,合并洗脱液,用多肽试剂盒定量。
客户发表论文:
1. Chang Tan, Geng Qin, Qian-Qian Wang, Kai-Min Li, Yuan-Chen Zhou, Shu-Kun Yao. Comprehensive serum proteomics profiles and potential protein biomarkers for the early detection of advanced adenoma and colorectal cancer, World J Gastrointest Oncol, . 2024 Jul 15;16(7):2971-2987. doi: 10.4251/wjgo.v16.i7.2971.(PuriMag混合磁珠富集血清低丰度蛋白)
2. Yating Wang et al. Proteomic and metabolomic analysis of plasma for pain at different labor stages, Talanta, 2024, 126905, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2024.126905 (PuriMag混合磁珠富集血浆低丰度蛋白)
3. 翟描忻. 调气通浊针法治疗超重/肥胖有效性及蛋白/代谢组学的探索性研究[D].北京中医药大学,2023.DOI:10.26973/d.cnki.gbjzu.2023.000673. (PuriMag混合磁珠富集血清低丰度蛋白)
本试剂盒仅供科研使用!