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HIC疏水作用琼脂糖磁珠 | Magarose-Butyl\Phenyl\Octyl

更新：2026-9-14 15:58:05点击：

产品品牌Magarose®
产品型号Magarose-Butyl\Phenyl\Octyl

产品介绍

一、概述

Magarose^®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标，内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖（6％）交联而成，粒径10~30 μm，保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性，显著加速操作和实验的重现性。琼脂糖离子交换磁珠，可快速、高效、灵敏、特异性地与带相反电荷的生物大分子结合，主要用于蛋白、抗体、多肽和核酸的分离纯化。Magarose^®️的疏水作用磁珠主要包括中等疏水Magarose-Butyl、中强疏水Magarose-Phenyl和强疏水Magarose-Octyl三种，三种疏水作用琼脂糖磁珠比较和选择请参见下表。

名称	Magarose-Butyl	Magarose-Phenyl	Magarose-Octyl
货号	PMAG046	PMAG066	PMAG086
疏水作用	中等	中强	强
配基	丁基	苯基	辛基
配基密度	~40 μmol/mL	~40 μmol/mL	~5 μmol/mL
选择性	中等，通用HIC	高，精细HIC	高，较强HIC
初始上样盐	1.0–1.5 M	1.0–1.5 M	1.5–2 M
洗脱难度	较容易	中等	较难
洗脱方式	0.5–0 M	0.5–0 M	1.0–0 M
蛋白强结合	较低	中	高
结合容量	~20mg HSA/ml	~40mg HSA/ml	~30mg HSA/ml
pH	工作pH3-13，清洗pH2-14
粒径	10 ~ 30 μm
储存	25%（v/v）in 20% ethanol
应用	生物分子纯化
储存	常温运输，2~8℃保存一年

HIC疏水琼脂糖磁珠利用高盐条件下增强的疏水相互作用捕获蛋白，并通过降低盐浓度实现洗脱。与传统柱层析不同，磁珠采用批式混合、磁分离、洗涤和洗脱方式，适合小规模纯化、方法开发及自动化磁珠工作站。

本说明书以Phenyl、Butyl和Octyl三类疏水配基为代表。具体产品的结合容量、最佳盐浓度及CIP条件应以实际批次验证数据和产品技术规格为准。

HIC磁性琼脂糖作用机制

二、操作流程

1. 缓冲液的准备

用途	推荐配方	备注
平衡/结合液	20 mM Na₃PO₄, pH 7.0；1.0–2.0 M (NH₄)₂SO₄	首次筛选建议1.5 M
洗涤液	20 mM Na₃PO₄, pH 7.0；与结合液相同或略低盐	通常2–3次
洗脱液	20 mM Na₃PO₄, pH 7.0；0–1.0 M (NH₄)₂SO₄	按目标蛋白优化
保存液	20% ethanol	2–8 ℃长期保存优先
再生	按产品验证选择NaOH、胍盐或尿素	不得直接假定所有磁珠耐受

2. 标准操作流程（100 μL沉降磁珠）

100 μL settled beads → 500 μL平衡液 ×2 → 加500 μL高盐蛋白样品 → 20–30 min温和混合 → 磁分离 → 保留FT → 500 μL高盐洗液 ×2–3 → 100–300 μL低盐洗脱液，5–10 min → 磁分离收集E1 → 必要时重复洗脱 → 再生/CIP → 20% ethanol保存。

2.1 磁珠预处理

取100 μL充分混匀的磁珠悬液。置于磁力架30–60 s，弃去保存液。避免磁珠在空气中长时间干燥。

2.2 平衡

加入500 μL平衡液，温和混匀5 min；磁分离并弃上清。重复2次。

2.3 样品调盐

将蛋白样品调至与结合液相近盐浓度。建议首次筛选最终(NH₄)₂SO₄为1.5 M；根据蛋白溶解性和结合情况调整。

2.4 结合

加入500 μL调盐后的样品，与100 μL磁珠混合。4–25 ℃温和旋转或翻转20–30 min。

2.5 磁分离

磁分离30–60 s，收集上清作为Flow-through（FT），用于SDS-PAGE或A280分析。

2.6 洗涤

加入500 μL洗涤液，温和混匀2–5 min；磁分离并弃上清。重复2–3次。

2.7 洗脱

加入100–300 μL低盐洗脱液，温和混匀5–10 min；磁分离，收集洗脱液E1。必要时重复1–2次。

2.8 再生/保存

若需重复使用，按验证过的再生方案处理；最终用水或平衡液置换后以20% ethanol保存。

3. Phenyl / Butyl / Octyl 推荐起始条件

条件	Phenyl	Butyl	Octyl
首次结合盐浓度	1.0→1.5 M	1.0→1.5 M	1.5→2.0 M
初始洗脱	0.5 → 0 M	0.5 → 0 M	1.0 → 0 M
操作重点	兼顾疏水作用与选择性	适合作为通用初筛介质	关注强结合和洗脱完全性
建议筛选盐	1.0/1.5/2.0 M	1.0/1.5/2.0M	1.5/2.0 M

注：以上为方法开发起始条件，不是所有蛋白的固定条件。HIC表现取决于蛋白表面疏水性、pH、盐种类/浓度、配基结构和配基密度。

4. 盐梯度筛选方案

推荐先固定磁珠用量和结合条件，再用阶梯盐浓度快速确定目标蛋白的洗脱区间。

组别	结合盐	洗脱盐	建议观察指标
A	1.5 M	1.0 M	是否开始洗脱
B	1.5 M	0.75 M	回收率
C	1.5 M	0.50 M	主峰位置
D	1.5 M	0.25 M	残留蛋白
E	1.5 M	0 M	总回收率

5. 磁珠用量与体系放大

沉降磁珠	建议样品体积	建议洗涤体积	建议单次洗脱体积
50 μL	0.25–0.5 mL	250 μL	50–150 μL
100 μL	0.5–1.0 mL	500 μL	100–300 μL
1 mL	5–10 mL	5 mL	1–3 mL

放大时优先按磁珠沉降体积（settled bead volume）和目标蛋白负载量计算，而不是简单按悬液体积计算。最终负载量应以实测动态/批式结合容量确定。

6. 再生、CIP与储存

再生和条件必须通过实际磁珠验证后固化。非磁性琼脂糖HIC介质的公开资料显示具有较好的碱、尿素、胍盐及乙醇耐受性，但磁性产品增加了磁性核心/表面改性步骤，不能未经验证直接套用。

长期保存建议：20% ethanol，2–8 ℃。使用前充分混匀，并用去离子水或适宜平衡液置换保存液。禁止让磁珠长时间完全干燥。

7. 问题解决

问题	可能原因	建议措施
目标蛋白不上珠	盐浓度不足；配基密度不足；结合时间短	提高盐浓度、增加磁珠量或延长结合时间
非特异蛋白较多	盐浓度过高；洗涤不足	降低结合盐或增加洗涤次数
蛋白洗不下来	疏水作用过强	降低洗脱盐浓度；延长洗脱时间；采用梯度
回收率低	洗脱条件不合适；磁珠损失	增加洗脱次数并检查磁分离回收
磁珠分散困难	干燥、团聚或样品黏度高	避免干燥；温和充分重悬；降低样品黏度
批间差异	粒径/配基密度/磁含量波动	建立D50、CV、配基密度、磁响应及DBC放行指标

参考文献：

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