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一、概述
Magarose®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标，内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖（6％）交联而成，粒径10~30 μm，保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性，显著加速操作和实验的重现性。
马来酰胺活化的琼脂糖磁珠（Magarose-MAL），可与携带自由巯基（SH）基团的生物分子偶联。马来酰亚胺通过环氧基和间隔臂与磁性琼脂糖偶联，从而获得对巯基功能具有高结合能力的基质。形成稳定的硫醚键，因此这些磁珠之后还可以用于其他应用。将蛋白质简单有效地共价固定到磁珠载体上，为抗体、抗原或其他生物分子的可定位固定提供了有价值的方法。
图1. MAL活化的琼脂糖磁珠用于固定含巯基分子
二、产品特性
产品名称
Magarose-MAL
货号
PMAG027
磁珠浓度
25% (v/v) in 100% 异丙醇
配基密度
30 ~ 50 μmol / ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
10 ~ 30 μm
配体结合
>15 mg Protein/ml磁珠
保存
常温运输，2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 缓冲液
所有的水和缓冲液均用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜进行过滤。
① Coupling Buffer I (PBS) pH 7.2, 250 mL;
② Coupling Buffer II pH 6.5, 250 mL;
③ Storage Buffer I, pH 6.5, 250 mL;
④ Storage Buffer II, pH 7.5, 250 mL
2. 偶联流程
该方案描述了一种将蛋白质与马来酰胺活化的琼脂糖磁珠（Magarose-MAL） 结合的操作方法。蛋白质通过共价方式结合，可用于不同的应用，例如纯化相互作用的伙伴蛋白。马来酰亚胺会在 pH 6.5-7.5 时与自由硫醇基反应，形成稳定的共价硫醚键。在 pH > 7.5 时，马来酰亚胺会与胺基反应。根据待结合蛋白质的性质，分别介绍了 pH 7.2 和 6.5 两种耦合缓冲液。如果不确定您的蛋白在何种缓冲液中最稳定，可在第一次小规模实验中尝试两种缓冲液。
如果蛋白中的半胱氨酸基团可能以氧化形式存在，请在耦合缓冲液中加入 TCEP。这种还原剂不应影响耦合反应。
本方案中给出的用量是针对 1 mL 马来酰亚胺活化磁珠悬液，其中包含 250 µL 磁珠。此反应可根据需要线性放大或缩小使用。
1) 转移 1 mL Magarose-MAL磁珠 (25%)到 2mL 离心管。
提示：偶联反应可以线性放大或缩小，通过增加或减少本协议中描述的缓冲液和溶液量来实现。
2) 磁分离，移除上清液。
3) 用Coupling buffer I 或II 洗涤磁珠3次。
提示：根据你的蛋白质的 pH 稳定性选择偶联缓冲液 I 或 II。在整个操作过程中使用相同的偶联缓冲液。
4) 将 0.5-1.5 mg 蛋白重悬在250 µl 的Coupling buffer I 或II。
提示：第一次偶联某种蛋白质时，尝试 3-5 种不同的蛋白质浓度，以确保反应中提供了足够的蛋白质，同时不浪费蛋白质。
5) 蛋白溶液加入磁珠涡旋混合。
6) 根据蛋白温度稳定性，选择20°C 孵育2h或4°C 孵育过夜，采用旋转混匀仪孵育。
7) 磁分离，移除上清液，280nm测定残余蛋白浓度。
提示：监测 280 nm 处的吸光度可以告诉你蛋白质的偶联效率（比较原始蛋白溶液的 A280 与步骤 6 中上清液的 A280 来确定偶联百分比）。这也有助于你确定高效偶联所需的最佳蛋白质量。
8) 用 1 ml Coupling buffer和 1 ml 双蒸水各洗涤1次。
9) 偶联完毕的磁珠重悬于 1 mL Storage buffer I 或 II。4°C保存。
3. 注意事项
1) 磁珠对水分敏感。为了保证产品质量，在取样之后需立即盖上瓶盖，并用封口膜密封，于4℃保存。
2) 禁止将磁珠干燥或冷冻。干燥和冷冻操作可能导致磁珠的聚集从而丧失结合活性。
3) 可通过间接法测定反应前后蛋白含量，或通过直接法检测偶联到磁珠表面的蛋白含量。蛋白稳定剂（如 BSA，gelatin）会抑制抗体与磁珠的结合，因此在磁珠偶联抗体过程中，需要确保抗体保存体系中不存在含伯氨基的蛋白稳定剂。
4) 缓冲液中含有带巯基的物质会抑制蛋白质偶联到磁珠表面，去除伯胺物质可采用透析和脱盐的方法。
