固定化胰蛋白酶Trypsin磁珠 MagStart-Trypsin——蛋白质组学前处理MagReSyn® Trypsin-生物磁珠专家

暂无更多图片。

固定化胰蛋白酶Trypsin磁珠 MagStart-Trypsin——蛋白质组学前处理MagReSyn® Trypsin

更新：2024-6-10 20:42:10点击：

产品品牌PuriMag
产品型号MagStart-Trypsin

产品介绍

订购信息
货号	规格
MS-TRP001	1 ml
MS-TRP010	10 ml

1. 产品描述

固定化胰蛋白酶MagStart-Trypsin是一种磁性聚合物微粒上的Trypsin。MagStart-Trypsin技术有别于传统的固体或裂解珠技术，因为它提供了一个超多孔聚合物网络，允许蛋白质渗透到整个微颗粒的体积中。这样就能多点共价连接Trypsin等蛋白质的多点共价附着，稳定酶在非标准条件下的应用，并防止自溶。MagStart-Trypsin可替代MagReSyn® Trypsin实现快速有效的蛋白质消解。

固定化胰蛋白酶MagStart-Trypsin设计目的是提高质谱分析产生的实验数据的质量。磁性微粒允许在磁处理平台实现样品消化自动化，从而提高通量和实验一致性。固定化蛋白水解酶的主要特点是可以增加样品覆盖深度，因为酶可在 MS 分析前去除。固定化提高了酶在非标准实验条件下的稳定性，如有机溶剂和离液盐的存在，从而提高蛋白质组学工作流程的通用性。磁微粒的胰蛋白酶含量高，可缩短方案时间。消化时间仅为 1 小时，达到通常只有 24 小时胰蛋白酶消化才能达到的数据质量。此外，微颗粒的可压缩性还减少了洗涤和洗脱过程中微颗粒之间的间隙，从而提高了这些步骤的效率。使用磁分离器，MagStart-Trypsin可快速分离（<20 秒）。竞争对手的微粒则需要长达 4 分钟的时间才能分离。

MagStart-Trypsin优势	益处
高Trypsin载量	高效消解 <60 min；增加难消解蛋白消解效率；降低反应体系体积；
在变性剂存在下消解	增加难消解蛋白的消解效率；
减少Trypsin的自消解	移除消解酶提高数据质量；
快速磁分离	方便高效移除Trypsin；高通量；自动化；
抗氧化	减少样品污染物；延长货架期。

Product Specifications
Description	Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application	Protein digestion, proteomics, mass spectrometry, sample preparation
Matrix	Proprietary polymer
Core	Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functionality	Trypsin
Particle Size	~5–10 μm
Formulation	15 mg/ml in 100 mM acetic acid
Stability	pH 8.0, 37 ℃
Storage	Store at 4–8⁰C until expiry date on label DO NOT FREEZE

注意：不当储存、微粒干燥、细菌污染或离心回收可能导致容量/性能的不可逆损失。使用前应充分混匀。

2. 样品准备、MagStart-Trypsin的平衡和消化

有几个因素会影响胰蛋白酶消化的效率。这些因素包括样品制备、缓冲液成分和 pH 值、污染物或干扰化合物的存在以及消化温度。MagStart-Trypsin可提高覆盖率，改善难消化蛋白质的裂解。如没达到最佳性能，请参阅下面的推荐样品制备/平衡/消化程序以及《常见问题》（第 3 节）。

注意：所有试剂均应新配并达分析级，以确保最佳性能。下文所述缓冲液仅作示例，并不具限制性。

2.1. 样品制备

为确保最佳消化，目标蛋白需变性、还原和乙酰化。

1) 将样品悬浮在含6–8 M 尿素的Tris缓冲液中（50 mM，pH 8.0）。

2) 加二硫苏糖醇（DTT）至终浓度为10 mM。

3) 室温孵育 1 h。

4) 加入碘乙酰胺（IAA）至终浓度为 30 mM。

5) 黑暗环境下孵育45 min。

6) 用Tris缓冲液（50 mM，pH 8.0）稀释或透析样品至尿素浓度 ≤1 M。

注意：固定化酶具有防止变性的稳定性，酶可能适合在非标准条件下使用，如增加离液盐的浓度（尽管活性会降低）。

2.2. MagStart-Trypsin的平衡

MagStart-Trypsin以15 mg/ml的悬浮在 100 mM 乙酸中。运输时磁微粒在消化缓冲液（50 mM Tris，pH 8.0）中平衡。按以下步骤平衡足够数量的微粒以进行消化反应如下所述：

1) 涡旋或倒转重悬 MagStart-Trypsin胰蛋白酶，以确保悬浮液均匀。

2) 将 20 µl的MagStart-Trypsin转移到一新试管中（20 µl的MagStart-Trypsin足以在60min内pH 8.0 的 50 mM Tris 溶液中消化 ~50 µg 总蛋白）。

注意：（1）起始蛋白量少于50 µg时，微粒的数量可减少到最少 5 µl，保持微粒与蛋白的比例。（2）在变性条件下（即 2-6M 尿素或高达 0.5% SDS）消化时，将微粒量至少增加到 60µl，消化时间至少增加到37°C下2 h。

3) 磁分离至澄清。

4) 吸除上清液。

5) 用移液管轻轻将MagStart-Trypsin再悬浮于 50 µl 的 Tris（50 mM, pH 8.0）中。

6) 将试管放在磁性分离器上，回收磁微粒。

7) 吸除上清液。

8）重复步骤5~7。

9）吸除上清液后，MagStart-Trypsin。

2.3. 蛋白消化流程

1) 将在消化缓冲液（50 mM Tris，pH 8.0）中预平衡过的蛋白质样品加入2.2的MagStart-Trypsin。

2) 使用 50 mM Tris 将总反应体积调至 50 µl。

3) 在 37°C 下用涡旋或合适的微离心管混匀器将样品孵育 60 min，以确保MagStart-Trypsin在消化过程中保持悬浮状态。由于样品量较少，不建议倒置混合。

4) 如上所述，磁回收微粒。

5) 将上清液（消化肽）转移到新离心管中。

6) 向微颗粒中加入50 µl 的5 M NH₄OH。

7) 在室温条件下，用涡旋或合适的微离心管混匀器将样品孵育20 min，洗脱过程中保持悬浮状态。由于样品量较少，不建议倒置混合。

8) 将离心管放在磁分离器上至澄清。

9) 将上清液（洗脱肽）转移到装有剩余消化肽的微离心管中（步骤 2.3.5）。

10) 向汇集的多肽中加入甲酸，至最终浓度为 0.5%。

注意：在使用低量起始蛋白质（少于 20 µg）时，建议通过冻干或真空干燥减少体积。

11) 使用 C18 柱子或其它合适方法对样品脱盐。

12) 进行质谱分析。

注意：如果蛋白质数量允许，可使用 SDS-PAGE 评估蛋白质消化的效率。

3. 常见问题

问题	可能原因	改善方法
不完全消化	消化pH不对	确保消解pH=8.0
	消解温度	确保消解温度为37 °C
	目标蛋白的消解位点不可及	在更高温度（如55 °C）消解或重新评估高离液盐消解条件（如 2-5 M尿素）
	初始蛋白中含干扰物	在推荐消解缓冲液中稀释或透析除去污染物
	初始蛋白量不对	采用其它蛋白定量方法
	消化时间不足	增加消解时间至4-6 h
低的序列覆盖率或低的质谱信号	最终洗脱肽中含干扰化合物	将洗脱下来的肽段进行脱盐
低的序列覆盖率或低的质谱信号	蛋白/微粒比例不合适	维持30µl 磁颗粒对50µg蛋白，方案可调整至最小5µl 磁颗粒对~10µg蛋白

本磁珠仅供科研使用！

更多产品

PuriMag™ Conca

PuriMag™ Anti-