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PuriMag™Homo-COOH是均匀的，单一化的超顺磁性1μm直径微球，由高度交联的聚苯乙烯和均匀分布的磁性材料组成。磁珠进一步涂覆有缩水甘油醚的亲水层，将氧化铁隐藏在其中。然后将羧基引入珠子的表面。小的1μm的PuriMag™Homo-COOH具有亲水性表面，可确保低特异性结合，优异的分散能力以及易于在各种缓冲液中处理。这些磁珠还具有高磁性迁移率和低沉降率，使其成为自动化分析的理想选择。 PuriMag Homo羧基磁珠以水性悬浮液形式提供。
一旦与您的配体结合，PuriMag磁珠可以添加到细胞裂解物或含有您的目标分子的其他悬浮液中。在短暂孵育以允许靶标的亲和捕获后，通过使用允许抽吸未结合材料的磁体将PuriMag磁珠拉到试管的侧面。此外，磁性分离有助于洗涤和浓缩与磁珠结合的分离的靶标。 PuriMag磁珠不抑制酶活性，并且可以直接包含在珠结合的靶分子的下游分析中。或者，可以用常规洗脱方法从PuriMag磁珠上洗脱目标分子。
二、产品特性
Bead diameter: 1 μm
Active chemical functionality: 600 μmol/g beads
Concentration: 10 mg/ml (7-12 x 109 beads/ml)
Density: 1.8 g/cm³
Coupling Buffer（偶联缓冲液）:
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
Coupling Agent（偶联试剂）:
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
Quench Buffer（淬灭缓冲液）:
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer（储存缓冲液）:
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
以下方案为配体与100μL的PuriMag Homo -COOH羧基磁珠的偶联方案。该方案可按需放大或缩小。强烈建议对珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶联条件（配体浓度、偶联缓冲液、pH、反应体积和温育时间）进行优化。
注意：
■ 通过涡旋确保磁珠均匀悬浮。
■ 为获得最佳性能，在无胺偶联缓冲液中偶联，蛋白应为0.5〜4mg / mL，寡核苷酸为20〜100μM，不含其它蛋白。较高浓度的蛋白可灵活地优化反应体积。含tris、甘氨酸、醋酸盐或柠檬酸盐的缓冲液不能使用。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES缓冲液（pH 6.0）可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时，寡核苷酸末端应有5'-胺基以偶联磁珠。
■ 珠子含有0.5％SDS以稳定悬浮液。尽管非必须，但在所有缓冲液中包含0.01〜0.05％Triton X-100或0.01〜0.05％吐温20将防止珠粒凝结并改善分散特性。
偶联方案A：使用EDC的两步偶联
该方案被推荐用于将蛋白偶联到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亚胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反应性中间体。除去EDC后，加入蛋白质配体并通过蛋白质上的伯胺与磁珠的活化羧基偶联。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
2. 涡旋振荡重悬PuriMag Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分离并吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液，涡旋20秒洗涤磁珠，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再次清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。
6. 向磁珠中加入80μL偶联缓冲液和20μL新配的EDC溶液，混匀。室温孵育15分钟，磁分离并吸弃上清。
7. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠，磁分离并吸弃上清。
注意：该步骤应该快速进行，因为磁珠上的胺反应性中间体不稳定。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白质或配体，涡旋混匀。
9. 室温下孵育30分钟。根据配体和浓度的不同，最佳孵育时间可能为0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含有未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。
偶联方案B：用sulfo-NHS替代两步偶联
该方案与上述方案类似，但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。
2. 涡旋振荡重悬PuriMag Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。
7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
9. 加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白或配体。涡旋混匀。在室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
偶联方案C：一步偶联
这是一个快速结合方案，在一个反应中同时加入羧基磁珠、EDC和配体。该方案最适合偶联寡核苷酸和小分子，当配体上的羧酸基团的激活不会影响后续实验时。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白或1〜5nmol寡核苷酸进行偶联。放在冰上。
5. 从磁力架上取下EP管。在80μL偶联缓冲液中加入50〜400μg配体。
6. 在室温下孵育30分钟。
7. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。
8. 将20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。涡旋混匀，室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
9. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清含未结合的配体，如果优化方案可以保存用于分析。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
部分采用本磁珠文献
1. Qiuyuan Lin, Zhipeng Huang, Xin Ye, Bin Yang, Xueen Fang, Baohong Liu, Hui Chen, Jilie Kong, Lab in a tube: Isolation, extraction, and isothermal amplification detection of exosomal long noncoding RNA of gastric cancer, Talanta, Volume 225, 2021, 122090, （羧基聚合物磁珠PuriMag Homo-COOH偶联抗体）
