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PuriMag™ HLB-X混合型高深度蛋白组学磁珠
近年来,在生命科学领域,为了进一步解析基因功能,蛋白质组学(Proteomics)和多肽组学(peptidomics)研究应运而生。蛋白质组学是在蛋白质层面讨论生命系统之现象,包括特定的细胞、组织、脏器中基因经转录转移而产生之全部蛋白质,可为疾病诊断、动植物育种和新药研发等领域所应用。基于飞速发展的质谱技术分析蛋白质,具有高效、快速、简单等显著特点,因而成为蛋白组学研究的重要工具。在质谱分析前,往往要对样本进行冗繁的前处理,达到浓缩富集目标蛋白的目的,再进行质谱分析。PuriMag磁珠法蛋白冠前处理试剂盒可以替代传统的蛋白质样本前处理手段用于蛋白组学样本前处理,作为快速解决这一问题的重要工具。PuriMag™ HLB-X混合型高深度蛋白组学磁珠是以磁性或可磁化的材料作为吸附剂的一种分散固相萃取技术,可简化蛋白质谱检测冗繁且不易自动化的前处理过程。
PuriMag™ HLB-X磁固相萃取系列磁珠,是厦门普睿迈格生物科技有限公司开发的纳米尺度的磁性吸附载体。该系列磁珠表面修饰丰富的苯基和吡咯烷酮基,因而具有平衡的亲疏水结合特性。本公司研发的PuriMag™ HLB系列磁珠具有如下显著特点:
Ø 磁珠粒径分布小,因而结合结果的精密度和重现性越好,有助于高灵敏度的质谱检测;
Ø 表面功能化基团密度平衡,能够均衡兼顾亲水、疏水、离子交换等结合机理;
Ø 磁珠的功能化基团修饰选择多,因而可实现对不同特性蛋白的选择性结合;
Ø 磁珠易分散,悬浮性好,吸附快,洗脱快,磁响应时间 <10 s,因而极大节约前处理时间。
PuriMag™ HLB系列磁珠可用于血浆、血清、全血、尿液等生物样本前处理,洗脱后目标物可富集,且无需过滤,无需氮吹浓缩,可直接进样检测。利用磁吸原理可实现全自动上样、淋洗、洗脱富集等步骤,与传统固相萃取技术相比,提取效率显著提高,尤其适合高通量操作。
PuriMag™ HLB-X系列磁珠
磁珠
货号
应用推荐
结合倾向
PuriMagTM HLB亲疏水平衡磁珠
HLB001
蛋白质组前处理
疏水蛋白
PuriMagTM HLB-WCX弱阳离子交换磁珠
HLB002
碱性蛋白pKa>10
PuriMagTM HLB-MCX强阳离子交换磁珠
HLB003
碱性蛋白pKa=2~10
PuriMagTM HLB-WAX弱阴离子交换磁珠
HLB004
酸性蛋白pKa<1.0
PuriMagTM HLB-MAX强阴离子交换磁珠
HLB005
酸性蛋白pKa=2~8
注:所有磁珠均保存于50%异丙醇中,浓度为10mg/ml,储存温度2-25 ℃。
PuriMag™ HLB-Mix混合磁珠
Cat.
Particle Description
Material
Zeta potential (mV)
Percent
(%)
HLB亲疏水平衡磁珠
Polymer
-20 ~ -30
25%
HLB-WCX弱阳离子交换磁珠
HLB-MCX强阳离子交换磁珠
-30 ~ -40
HLB-WAX弱阴离子交换磁珠
10 ~ 20
12.5%
HLB-MAX强阴离子交换磁珠
10 ~ 30
TE缓冲液
0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4)
操作流程
样品准备
1. 血浆和血清样本用含0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl,pH7.4) 按1:5稀释。(注意:20μL样本与80μL缓冲液混合或40μL样本与60μL缓冲液混合。)
磁珠准备
2. 磁性纳米粒子上下振荡摇匀,取50μL磁珠磁分离,去上清,加入100μL的TE 缓冲液,超声分散10 秒 。磁分离,去上清。再加入100μL的TE 缓冲液,超声分散10 秒。
孵育
3. 为了形成蛋白冠,在上述100 μL 磁性纳米粒子悬液中加入 100 μL 稀释的样本,超声分散20 秒,于37 °C下1100-1300 rpm振荡孵育1h。(注意:孵育时避免磁珠沉降)
收集磁珠
4. 孵育后,磁分离 5 min ,移去上清液。
洗涤磁珠
5. 用200 μL的TE 缓冲液洗涤磁珠3次,每次洗涤1300-1500rpm下振荡5min,并磁分离去上清。(注意:尽量洗去表面高丰度蛋白)
酶解洗脱
6. 为了水解蛋白冠,采用胰蛋白酶试剂盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解缓冲液,并95 °C 搅拌加热 10 min 。冷却到室温后,加入胰蛋白酶消化液,37 °C 振荡孵育 3 h。加入终止液停止消化。磁分离,将上清液移到新管中。用过滤柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sulfonate [SDB-RPS])过滤,使用75 μL 洗脱液洗脱多肽2次,合并洗脱液,用多肽试剂盒定量。
本试剂盒仅供科研使用!