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1. 概述
PuriMagTM G-DADPA活化的磁性纳米粒子是均匀的，基于亲水聚合物包覆的超顺磁珠，表面涂有高密度的DADPA（二氨基二丙胺，Diaminodipropylamine）官能团。 类固醇、染料、药物等是一类小分子，由于缺乏或难以获得易反应的伯胺、巯基、羰基和其它常见偶联基团，因此难以或不可能通过当前的固定方法固定。 但是，这些小分子可能会通过在曼尼希反应（Mannich reaction）中与甲醛和胺缩合的活性氢而被固定在DADPA封端的磁珠上。PuriMagTM G-DADPA磁珠可固定化具有活性氢的类固醇、药物和化学化合物，以用于亲和纯化。
特点与优势：
w 高结合能力；
w 快速、高效的偶联；
w 亲水性长臂间隔子，可将空间位阻和非特异性结合降至最低。
偶联反应方程：
能发生Mannich Reaction的常见活泼氢类型：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
DADPA group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in 50% acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是将含胺配体与PuriMagTM G-DADPA封端的磁珠偶联的示例。强烈建议进行滴定，以优化用于每种单独应用的磁珠量。该协议可相应地按比例放大和缩小。
偶联缓冲液或配体不应包含任何氨基（例如Tris）或甲酰基。由于溶液相聚合，含氨基配体的偶联效率非常低。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手动操作）：用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管（Mrack02）；用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管（目录号Mrack03）
2）偶联缓冲液：0.1 M MES，0.15 M NaCl，pH 4.7
3）洗涤缓冲液：0.1 M Tris，pH 8.0
4）偶联试剂: 37% formaldehyde
B. 偶联方法
B-1.样品制备
如果可溶，将1-10mg配体溶于1ml偶联缓冲液中。如果不溶，则将其溶于0.5 ml 100％乙醇中，然后添加0.5 ml偶联缓冲液制成50％乙醇/缓冲液。 （注意：如果使用乙醇进行偶联，则在添加样品之前必须用50％乙醇洗涤磁珠。）
B-2. PuriMagTM磁珠的制备
注意：将PuriMagTM磁珠按10 mg/ml悬浮在20％乙醇水中，剧烈涡旋分散磁珠并储存在4 ℃。使用前混匀PuriMagTM磁珠。
1) 将10mg磁珠转移至EP管中。
2) 将EP管置于磁磁力架上1min，吸弃上清液，用1ml偶联缓冲液重新悬浮磁珠。
3) 重复步骤2三次。
B-3. 偶联
1）将准备好的样品和100μl偶联试剂添加到洗涤过的PuriMagTM磁珠中，充分混合，并在38~60℃下连续旋转孵育48小时以上。
注意：用户应凭经验确定最佳的偶联反应时间和温度。
2）用1ml偶联缓冲液洗涤磁珠四次，然后用纯水洗涤两次。
注意：如果在50％乙醇中偶联了不溶性配体，则应先用50％乙醇洗涤珠子3次，然后用去离子水洗涤两次，然后用100％乙醇洗涤两次，最后用去离子水洗涤两次
3）将磁珠重悬在含0.05％叠氮化钠的缓冲液中，并保存在4℃下。
C. 一般亲和纯化方案
注意：设计通用的纯化DNA或RNA的方案相对简单，因为核酸的生化特性相对一致。但是，设计一种通用的亲和纯化方案非常困难，因为每种蛋白质都有不同的组成和结构。为了获得最佳结果，每个用户都必须为各个应用程序确定最佳工作条件。
1）将最适量的磁珠转移到离心管中。磁分离1~3分钟，除去上清液。
注意：强烈建议根据粗样品中目标蛋白的量进行滴定，以优化用于每种应用的磁珠的量。所用磁珠过多会导致较高背景，而所用磁珠太少则会导致较低产量。每mg的磁珠通常结合1~20 μg的目标蛋白。
2）取下离心管，用5倍磁珠体积的PBS缓冲液悬浮30秒。磁分离1~3分钟，除去上清。
3）重复步骤2两次
4）将洗涤过的PuriMagTM磁珠加入含有目标蛋白的粗样品中，并在室温或所需温度下孵育1~2小时（较低的温度需要更长的孵育时间）。
5）用5倍磁珠体积的PBS缓冲液或1M NaCl充分洗涤磁珠，直到280 nm洗脱液的吸光度接近背景水平（OD 280 <0.05）。
