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一、概述
羧基磁珠（PuriMag G-COOH）是采用亲水的高分子材料GMA与超顺磁性材料复合形成的一种新型功能化磁性纳米颗粒，提供永久结合和固定各种胺基配体。与传统磁珠相比，PuriMag G-COOH磁珠具有超顺磁性、更快的磁响应性同时保持微球良好的分散性、极低的非特异性吸附和更高的表面羧基密度等特性，能便捷高效地与多种生物配体（蛋白、多肽、寡聚核苷酸、药物分子等）进行高载量共价偶联，具有非常高的目标物质结合能力，是医学与分子生物学研究中重要的载体工具。用EDC活化磁珠表面的羧基，使配体通过伯胺基与羧基磁珠偶联，可形成稳定的酰胺键。 PuriMag G-COOH磁性纳米颗粒，适用于各种磁性分离应用，包括亲和力富集、蛋白质纯化、免疫沉淀和细胞分选。
二、产品特性
1. 短链羧基磁珠PuriMag GS-COOH
基团密度> 600 umoles carboxylic acid/g beads
2. 长链羧基磁珠PuriMag GL-COOH
羧基密度> 300 μmoles carboxylic acid/g beads
形态：超顺磁球形
直径：200nm
储存：10 mg/mL ，去离子水中 2~8 °C保存，勿冻结。
常温运输，正确使用保存期一年。
三、缓冲液
Coupling Buffer（偶联缓冲液）:
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
Coupling Agent（偶联试剂）:
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
Quench Buffer（淬灭缓冲液）:
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer（储存缓冲液）:
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
四、PuriMag G-COOH的使用
以下方案为配体与100μL的PuriMag G-COOH羧基磁珠的偶联方案。该方案可按需放大或缩小。强烈建议对珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶联条件（配体浓度、偶联缓冲液、pH、反应体积和温育时间）进行优化。
注意：
■ 通过涡旋确保羧基磁珠均匀悬浮。
■ 为获得最佳性能，在无胺偶联缓冲液中偶联，蛋白应为0.5〜4mg / mL，寡核苷酸为20〜100μM，不含其它蛋白。较高浓度的蛋白可灵活地优化反应体积。含tris、甘氨酸、醋酸盐或柠檬酸盐的缓冲液不能使用。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES缓冲液（pH 6.0）可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时，寡核苷酸末端应有5'-胺基以偶联羧基磁珠。
■ 珠子含有0.5％SDS以稳定悬浮液。尽管非必须，但在所有缓冲液中包含0.01〜0.05％Triton X-100或0.01〜0.05％吐温20将防止羧基磁珠凝结并改善分散特性。
偶联方案A：使用EDC的两步偶联
该方案被推荐用于将蛋白偶联到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亚胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反应性中间体。除去EDC后，加入蛋白质配体并通过蛋白质上的伯胺与磁珠的活化羧基偶联。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
2. 涡旋振荡重悬PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分离并吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液，涡旋20秒洗涤磁珠，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再次清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。
6. 向磁珠中加入80μL偶联缓冲液和20μL新配的EDC溶液，混匀。室温孵育15分钟，磁分离并吸弃上清。
7. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠，涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
注意：该步骤应该快速进行，因为磁珠上的胺反应性中间体不稳定。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白质或配体，涡旋混匀。
9. 室温下孵育30分钟。根据配体和浓度的不同，最佳孵育时间可能为0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含有未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。
偶联方案B：用sulfo-NHS替代两步偶联
该方案与上述方案类似，但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。
2. 涡旋振荡重悬PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离并吸弃上清。
3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。
7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。
9. 加入100μL偶联缓冲液和50〜400μg蛋白或配体。涡旋混匀。在室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。
偶联方案C：一步偶联
这是一个快速结合方案，在一个反应中同时加入羧基磁珠、EDC和配体。该方案最适合偶联寡核苷酸和小分子，当配体上的羧酸基团的激活不会影响后续实验时。
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50〜400μg蛋白或1〜5nmol寡核苷酸进行偶联。放在冰上。
5. 从磁力架上取下EP管。在80μL偶联缓冲液中加入50〜400μg配体。
6. 在室温下孵育30分钟。
7. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。
8. 将20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。涡旋混匀，室温下连续混合孵育0.5〜4小时。
9. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清含未结合的配体，如果优化方案可以保存用于分析。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30〜60分钟。磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
13. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2〜8°C储存偶联好的磁珠。
更多其它羧基磁珠请参考：
羧基琼脂糖磁珠 http://www.purimagbead.com/Product/6397142410.html
羧基二氧化硅磁珠 http://www.purimagbead.com/Product/3076912849.html
部分采用本磁珠文献：
1. 唐淑阁. 新型MRPCs编码微球的制备及适配体技术快速检测食品中AFB_1[D].郑州大学,2018. （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联适配体）
2. 龚如月, 于淑媛, 王书博, 姜艳平, 崔文, 乔薪瑗, 王丽, 周晗, 徐义刚, 李一经, 唐丽杰. 基于重组 IBDV VP3 蛋白的免疫磁珠间接 ELISA抗体检测方法的建立及初步应用, 中国兽医科学, 2019, 49 （ 06) ： 678-686 （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联抗原检测IBDV抗体）
3. Zhiyu Zhang, Xinyu Cheng, Jia-Bin Li, Guoqiang Xu,Quantitative proteomic analysis of glycosylated proteins enriched from urine samples with magnetic ConA nanoparticles identifies potential biomarkers for small cell lung cancer, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，Volume 206, 30 November 2021, 114352（羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联凝集素纯化糖肽）
4. 贺雯钰. 新型电化学发光microRNA传感器及BCNO量子点发光体系的研究[D].西北大学,2021.DOI:10.27405/d.cnki.gxbdu.2021.001065. （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联核苷酸）
5. Na Wu, et al. Ratiometric 3D DNA Machine Combined with Machine Learning Algorithm for Ultrasensitive and High-Precision Screening of Early Urinary Diseases, ACS Nano, 2021, 15, 12, 19522–19534. https://doi.org/10.1021/acsnano.1c06429 (G-COOH羧基磁珠偶联核酸)
6. Yuanbin Guo, et al. Selection and preliminary application of DNA aptamer targeting A549 excreta in cell culture media, Microchemical Journal, Volume 171, 2021, 106811,
https://doi.org/10.1016/j.microc.2021.106811. （G-COOH羧基磁珠偶联核酸）
8. 唐爽,张红燕,吴仁安等.固定化乙酰胆碱酯酶的制备及其在中药抑制剂筛选中的应用[J].广州化工,2022,50(09):57-59. （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联酶） 9. 潘晖,许银,王小红等.磁分离结合q PCR快速检测酱卤肉中的沙门氏菌[J/OL].现代食品科技:1-7[2023-09-19].DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2023.9.0235. （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联噬菌体） 10. 李琪,冯吉,张娴等.基于磁分离技术的免疫传感器测定乳粉中的乳铁蛋白[J].现代食品,2023,29(01):180-182.DOI:10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2023.01.047. （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶联噬菌体）
11. Fang, H., et al. Nickel-Doped Microfluidic Chip for Rapid and Efficient Immunomagnetic Separation and Detection of Breast Cancer Cell-Derived Exosomes. Appl Biochem Biotechnol 195, 3109–3121 (2023). https://doi.org/10.1007/s12010-022-04272-1 (G-COOH羧基磁珠偶联抗体)
12. Qianqian Zhuang, et al. 1-Deoxynojirimycin promotes cardiac function and rescues mitochondrial cristae in mitochondrial hypertrophic cardiomyopathy, J Clin Invest. 2023;133(14):e164660. https://doi.org/10.1172/JCI164660. (G-COOH磁珠偶联蛋白)
13. Yifeng Ding, et al. Magnetic microbead enzyme-linked immunoassay based on phage encoded protein RBP 41-mediated for rapid and sensitive detection of Salmonella in food matrices, Food Research International, Volume 163, 2023, 112212, https://doi.org/10.1016/j.foodres.2022.112212. （G-COOH磁珠偶联蛋白和Mrack磁力架）
14. Qiaoling Du, et al. A novel phagomagnetic separation-ATP bioluminescence (PhMS-BL) for rapid and sensitive detection of viable Vibrio parahaemolyticus in aquatic product, Food Chemistry, Volume 439, 1 May 2024, 138113. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2023.138113 (G-COOH磁珠偶联噬菌体检测副溶血性弧菌)
