PuriMag™ 固定化 TCEP 二硫键还原磁珠-生物磁珠专家

更新：2025-2-24 21:12:48点击：

产品介绍

采用特殊设计的磁性颗粒高效还原蛋白质、多肽及其他含二硫键分子的二硫键。TCEP（三(2-羧乙基)膦）磁性颗粒可避免传统离心柱或重力流柱分离还原样品与还原剂的耗时操作。

固定化 TCEP 磁珠的核心优势

快速分离：通过磁珠固定 TCEP，可快速从反应体系中移除还原剂，减少下游实验干扰。

理化特性：TCEP 作为一种水溶性、无味、无毒且高度稳定的蛋白质还原剂，是替代 β-巯基乙醇和 DTT（二硫苏糖醇）的理想选择。其优势在于：

产品特性

基团密度：25~40 微摩尔/克磁珠
颗粒形态：超顺磁性微球
粒径：标称直径 0.2 微米
储存条件：
- 保存于 20% 乙醇、1 mM EDTA 溶液中（浓度 10 mg/mL），2~8°C 避光储存，禁止冷冻
- 运输温度：常温（短期运输不影响活性）
- 有效期：妥善储存及操作条件下，保质期 1 年

操作要点

反应适用性
- pH 范围：pH 4.0-9.0（广谱兼容）
- 温度范围：5-95°C（适用于多数温控策略）
变性剂使用规范
- 常规推荐：大多数蛋白质无需变性剂即可有效还原
- 深层处理建议：对于含内部二硫键的复杂结构，可添加 6M 盐酸胍暴露隐藏位点以确保完全还原
- 禁用说明：避免使用尿素，因其生成的氰酸盐会与巯基发生副反应
离子干扰控制
- 还原缓冲液中需添加 5-20 mM EDTA，以螯合 Zn²⁺、Cu²⁺、Mg²⁺ 等二价金属离子，防止巯基再氧化
样品处理时效性
- 还原后的样品应立即使用，避免二硫键重新形成

标准操作流程（示例）
注：建议通过预实验优化磁珠用量（可根据需求按比例扩增或缩减体系）

缓冲液配制

操作步骤
A. 磁珠预处理

悬浮磁珠：取适量磁珠，用超纯水配制 50 mg/mL 悬浮液
关键提示：
- 现配现用效果最佳，4°C 短期储存不超过 1 周（活性无显著衰减）
混悬磁珠：使用前涡旋振荡或摇匀至磁珠完全分散
注意：磁珠静置后需在 2 分钟内分装使用，防止沉降

B. 样品处理

转移磁珠：将所需量的磁性颗粒转移至离心管
注：需根据实验体系优化磁珠用量，典型配比为：
- 磁珠用量：30-50μl（对应3-5mg磁珠）
- 样品体积：30-50μl（含50-80μg蛋白/多肽）
磁场分离：将离心管置于磁力架上静置1-3分钟，待上清澄清后，趁管身仍在磁架上移除上清
样品混合：
- 轻柔混匀法：用移液器反复吹打25次（约1分钟）
- 快速混匀法：涡旋振荡5分钟（2000 rpm）
还原反应：室温下端对端旋转孵育1小时
产物分离：再次将管置于磁力架1-3分钟，磁吸状态下将上清转移至新管

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