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一、概述
Magarose®️是厦门美博泰生物独家注册的琼脂糖磁性微球商标,内含顺磁性纳米颗粒的琼脂糖(6%)交联而成,粒径10~30 μm,保证了高比表面积、易悬浮、快速磁分离等特性,显著加速操作和实验的重现性。
羧基活化琼脂糖磁珠(Magarose-COOH)含有羧基官能团。配体的胺基通过碳二亚胺(EDC)偶联方法与羧基活化琼脂糖磁珠。在该偶联方法中,树脂的游离羧基与配体的胺基反应,在水溶性碳二亚胺如EDC(N-ethyl-N’-(3-dimethylaminopropyl)存在下,在低pH(4-5)形成稳定的肽键。由于Magarose-COOH磁珠在有机溶剂中稳定,如果需要,可在有机溶剂中进行偶联。
图1. 羧基活化琼脂糖磁珠用于固定含胺分子
二、产品特性
产品名称
Magarose-COOH
货号
PMAG016
磁珠浓度
25% (v/v) in 20% EtOH & 0.9% NaCl
配基密度
~ 60 μmol COOH/ ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
10 ~ 30 μm
配体结合
>20 mg IgG/ml磁珠
保存
常温运输,2~8℃保存一年
注:磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关,此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 所需材料
w EDC:碳二亚胺
注意: 碳二亚胺用量是微球羧基含量的10-100倍。偶联过程可从0.1M浓度起始,逐渐增加浓度优化。
w Coupling Solution: pH4.5-6的去离子水。或50 %的甘油溶液或二氧六环,调pH 4.5-6。
注意: 使用有机溶剂时,不要使用电极测量pH,会损坏电极。不要使用含胺、磷酸盐或羧基的缓冲液,会与磁珠表面基团竞争反应位点。蛋白、多肽和其它含伯胺小分子的浓度应高于表面羧基含量。
w Coupling conditions: 4 ~ 25℃, pH4.5 ~ 6 反应1.5-24 h。也可在有机溶剂中偶联。
2. 偶联方法
2.1用于偶联的配体的制备
将蛋白质或配体溶解在Coupling Solution中偶联,pH:4.5-6。如果蛋白质所在缓冲液干扰偶联,则需脱盐或透析进行缓冲液交换至偶联液。
2.2 用于偶联的磁珠的制备
用蒸馏水(pH4.5-6)洗磁珠五次,然后用0.5M的 NaCl(80ml溶液/ ml沉淀磁珠)洗涤磁珠。
2.3 配体与Magarose-COOH磁珠的偶联
1) 以1:0.5至1:1的比例将配体溶液加入琼脂糖磁珠中并轻轻混合以制备悬浮液。
2) 将EDC溶液加入悬浮液中至终浓度为0.1M。
3) 根据配体的类型,将悬浮液在4℃-RT下翻转混合1.5-24小时。
注意:通常在低温下耦合,则偶联反应时间需增加。
4) 在反应的第一个小时期间用0.1M NaOH调节反应混合物的pH。
注意:反应的第一个小时内pH值会降低。
5) 用含有0.5M NaCl的0.1M乙酸盐缓冲液(pH4)洗涤磁珠,然后用含有0.5M NaCl的0.1M Tris-HCl缓冲液pH8洗涤。
6) 重复步骤5两次。
7) 如果在偶联中没有使用有机溶剂,用5-10磁珠体积的蒸馏水洗涤磁珠。将树脂储存在2-8 ℃的20%乙醇中,加入0.02%叠氮化钠。
注意:当使用有机溶剂进行偶联时,用有机溶剂清洗磁珠,除去过量的配体,然后用蒸馏水清洗。
客户发表相关论文:
1. Huanhuan Wang, et al. Screening and application of inhibitory aptamers for DNA repair protein apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, International Journal of Biological Macromolecules, Volume 242, Part 3, 2023, 124918, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.124918. (Magarose-COOH偶联蛋白)
2. Jiang S, Lin Y, Zheng S. Development of the IMP biosensor for rapid and stable analysis of IMP concentrations in fermentation broth[J]. Biotechnology Journal, 2024, 19(6): 2400040. (琼脂糖磁珠偶联蛋白)
3. Qi, Zijun, et al. "Bile salt sensitive fluorescent probes for visualization of enzymatic proteolysis of hydrogels: Development and application to whey protein digestion." Food Chemistry 492 (2025): 145374.