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一、概述
羧基活化琼脂糖磁珠（Magarose-COOH）含有羧基官能团。配体的胺基通过碳二亚胺（EDC）偶联方法与羧基活化琼脂糖磁珠。在该偶联方法中，树脂的游离羧基与配体的胺基反应，在水溶性碳二亚胺如EDC（N-ethyl-N’-(3-dimethylaminopropyl）存在下，在低pH（4-5）形成稳定的肽键。由于Magarose-COOH磁珠在有机溶剂中稳定，如果需要，可在有机溶剂中进行偶联。
二、产品特性
产品名称
Magarose-COOH
货号
PMAG016
磁珠浓度
25% (v/v) in 20% isopropanol
配基密度
~ 60 μmol COOH/ ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
20-45μm
配体结合
>20 mg IgG/ml磁珠
保存
常温运输，2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 所需材料
w EDC：soluble carbodiimide as its essential for coupling
NOTE: The concentration of carbodiimide used forcoupling is 10-100 times greater than concentration of the resin active groups. One can start initially with 0.1M and later increase to obtain optimum concentration for coupling.
w Coupling Solution: E.g.: Distilled water with pH adjusted to 4.5-6. Purified 50 % glycerol or dioxane with pH adjusted to 4.5-6
NOTE: Do not use electrodes for measuring pH when using organic solvents as they may damage electrodes. Use pH paper instead. Do not use buffers having amino, phosphate or carboxyl groups as they will compete with ligand for binding to the resin.
w Protein, peptide or other small and large ligands with primary amines groups depending upon what molecule need to be affinity purified. Ligand concentration should be excess of resin active groups.
w Coupling conditions: at 4℃- 25℃, pH: 4.5 -6 for 1.5 -24 h, Coupling could be done in organic solvents.
2. 偶联方法
2.1用于偶联的配体的制备
将蛋白质或配体溶解在Coupling Solution中偶联，pH：4.5-6。如果蛋白质所在缓冲液干扰偶联，则需脱盐或透析进行缓冲液交换至偶联液。
2.2 用于偶联的磁珠的制备
用蒸馏水（pH4.5-6）洗涤适量的磁珠五次，然后用0.5M的 NaCl（80ml溶液/ ml沉淀磁珠）洗涤磁珠。
2.3 配体与Magarose-COOH磁珠的偶联
1) 以1：0.5至1：1的比例将配体溶液加入琼脂糖磁珠中并轻轻混合以制备悬浮液。
2) 将EDC溶液加入悬浮液中至终浓度为0.1M。
3) 根据配体的类型，将悬浮液在4℃-RT下翻转混合1.5-24小时。
注意：通常在低温下耦合，则偶联反应时间需增加。
4) 在反应的第一个小时期间用0.1M NaOH调节反应混合物的pH。
注意：反应的第一个小时内pH值会降低。
5) 用含有0.5M NaCl的0.1M乙酸盐缓冲液（pH4）洗涤磁珠，然后用含有0.5M NaCl的0.1M Tris-HCl缓冲液pH8洗涤。
6) 重复步骤5两次。
7) 如果在偶联中没有使用有机溶剂，用5-10磁珠体积的蒸馏水洗涤磁珠。将树脂储存在2-8 ℃的20%乙醇中，加入0.02％叠氮化钠。
注意：当使用有机溶剂进行偶联时，用有机溶剂清洗磁珠，除去过量的配体，然后用蒸馏水清洗。
客户发表相关论文：
1. Huanhuan Wang, et al. Screening and application of inhibitory aptamers for DNA repair protein apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, International Journal of Biological Macromolecules, Volume 242, Part 3, 2023, 124918, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.124918. (Magarose-COOH偶联蛋白)
