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【产品介绍】
磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒是普睿迈格生物科技有限公司最新研制的一种细菌基因组DNA提取试剂盒。本产品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解细菌细胞，释放出基因组DNA，在结合液的作用下磁珠选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去磁珠吸附的少量杂质。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。从1ml的菌液中可以获得10~20 µg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。适用于手工细菌基因组DNA的提取，可配合各类磁棒式核酸提取仪或自动化/半自动化工作站。
【特点】
l 耗时少：细菌DNA提取周期在50分钟左右；
l 操作简便：提取过程无需离心；
l 无毒无害：试剂中不含有氯仿，酚等有毒物质；
l 效果稳定：OD260/OD280稳定在1.7-2.0之间，获得细菌基因组DNA的纯度更高；
l 自动化：可以同时处理多个样品，实现细菌基因组提取的高通量化和自动化。
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存，其余试剂室温保存，有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠（通常需涡旋振荡20秒）。
【试剂盒组成】
组分
100次
保存
Lysis buffer
20 ml
常温
Binding buffer
18ml
Wash buffer
75%乙醇（用户自备）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
蛋白酶K
1 ml
溶菌酶
2 ml（选配试剂）
异丙醇
用户自备
DNA浓度及纯度检测 ：（1）得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关，所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 （2）DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA，40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9，如果洗脱时使用去离子水，比值会偏低，因为pH和离子会影响吸光度，并不表示纯度低。
【操作步骤】
分菌→
1) 牙签挑取平板菌落（1 mm）或取过夜培养细菌1 ml（细胞数为108-109）加入1.5 ml离心管。9000 rpm离心1 min，弃上清。（可选步骤：对于革兰氏阳性菌，加入200 ul溶菌酶溶液重悬菌体，37 ℃水浴30~60 min。对细胞壁较厚的革兰氏阳性菌，如金黄色葡萄球菌，可补加溶葡球菌酶助破壁。离心后备用。）
裂解→
2) 加入200 ul Lysis buffer摇匀，漩涡振荡混匀，室温温育10分钟至溶液变粘稠；加入10 ul蛋白酶K，漩涡振荡器混匀，56 ℃消化30 min。（可选步骤：若革兰氏阳性菌溶液浑浊未消化完全，可12000 rpm离心2min后取上清使用。）
除RNA→
3) 加入20 ul的 RNase A, 漩涡振荡混匀，室温温育10分钟以除去RNA。
除蛋白→
4) 向离心管中加入180 ul Binding buffer，漩涡振荡1-2 s。
结合→
5) 取400 ul试样加入磁珠悬液中（20 ul的 PuriMag bead和280 ul的异丙醇在一个新离心管中先预混），静置5分钟后，于磁力架上磁分离20 s，去上清。
洗涤→
6) 向离心管加入700 ul Wash buffer，移液枪缓慢吹打混匀，磁力架上静置20 s，小心吸弃上清（重复该步骤2次）。倒置离心管2-3 min，室温晾干5 min，让残留乙醇挥发干净，以免影响后续实验。
洗脱→
7) 向离心管加入50~100 ul Elution buffer，缓慢吹打混匀1~2 min。（Elution buffer在65~70 ℃中预热后洗脱效果更好，减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度）离心管磁力架上静置0.5 min，小心吸走上清放入新离心管即为提取的DNA，存放于2-8 ℃，长期存放需置于-20 ℃。
提示：本试剂盒仅限科研用途。
