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I. 简介
核苷酸、辅因子和糖蛋白是碳水化合物的代谢衍生物。在结构上，都具有顺式-1,2-和1,3-二醇作为常见官能团。当置于合适pH的硼酸时，二醇转化为稳定的硼酸酯（如方案1）。将硼酸固定在载体上提供了一种有效的方法，用于从复杂混合物中分离多种含二醇的生物分子，从小分子到完整的糖蛋白和RNA。利用硼酸酯形成的可逆性，捕获的化合物可以在温和的条件下方便地回收用于进一步的应用或分析。固定化的硼酸与糖（如甘露糖，半乳糖，葡萄糖或核糖）上的邻位顺式 - 二醇基团结合。在结合和洗涤步骤之后，可以通过降低pH或通过添加山梨糖醇将含糖样品从颗粒洗脱。同样，固定化的硼酸与含有N-和O-连接寡糖的糖蛋白或糖肽反应，可以用于纯化特定蛋白和多肽。基于磁珠固定化的硼酸PuriMag G-BA，因其突出的快速磁分离特性，为该过程提供了极大的方便，是分离含二醇的生物分子的有效工具。
纯化方案1.硼酸与其相应的硼酸酯的解离平衡（pKa〜9），它与顺式二醇官能团反应形成的四方硼酸酯易水解。可通过方法1）降低pH解离或通过方法2）用山梨糖醇竞争替代释放被捕获的二醇。
II. 产品信息
产品名称：PuriMag G-BA
平均尺寸：0.2 μm (+/- 0.02μm)；
浓度：10 mg/ml (w/v: 10 mg/ml in ddH2O, 0.05 % sodium azide)；
磁性颗粒含量（每克干固体）> 80％；
III. 缓冲液
• Wash & Binding buffer (W & B buffer): 0.25 M ammonium acetate, 50 mM MgCl2, pH 9.5.
• Elution buffer: 50 mM Tris, 0.1 M sorbitol, pH 8.5.
Note: Instead of Elution buffer, elution with 75% MeOH containing 50mM formic acid may be helpful.
IV. 产品储存
本产品在2〜8°C储存后，在购买日期后至少可稳定1年。将珠粒保存在封闭的小瓶中并保持直立状态，以防止珠子干燥。不要冻结产品。使用前使用涡珠悬浮液。 PuriMag G-BA与质谱应用中常用的溶剂兼容。
V. 通用方案
以下通用方案描述了含有邻位顺式-二醇的分子与PuriMag G-BA的结合和洗脱操作流程。
1. 在2 ml微量离心管中加入100μl的PuriMag G-BA微球，加入1.0 ml 的W＆B缓冲液。将试管置于磁力分离器上，等待30秒钟，以从上清液中分离珠粒。取出上清液并重复此步骤两次。用0.5 ml 的W＆B缓冲液完全重悬微球。
2. 将样品加入微球并用W＆B缓冲液填充至最大体积1ml。
3. 通过温和混合（管旋转器）在室温下孵育15-30分钟。
4. 将试管放在磁力分离器上，等待30秒钟，将珠子从上清液中分离出来。
5. 加入1.5 ml的 W＆B缓冲液，充分悬浮，磁分离，弃上清液，重复洗涤两次。
6. 加入100μl洗脱缓冲液，涡旋并在室温下在热混合器中孵育15分钟或者中间摇动试管。
7. 将试管置于磁分离器上，等待30秒钟，以从上清液中分离珠粒。将上清液转移至新管中，即为纯化后的产物。
引用本磁珠参考文献：
1. Bin Luo, et al. Construction of a magnetic covalent organic framework with synergistic affinity strategy for enhanced glycopeptide enrichment, Journal of Materials Chemistry B, 07 Jul 2021, https://doi.org/10.1039/D1TB01168E
2. Yiting Luo, et al. Mesoporous materials for glycopeptide separation, TrAC Trends in Analytical Chemistry, Volume 167, 2023, 117234, https://doi.org/10.1016/j.trac.2023.117234. （Si-BA磁珠分离糖蛋白）
