儿茶酚胺代谢产物的磁固相萃取快速检测方案—

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儿茶酚胺代谢产物的磁固相萃取快速检测方案——代谢组学磁珠

更新：2024-8-14 22:47:41点击：

产品品牌PuriMag
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产品介绍

一、概述

儿茶酚胺( CAs)类物质由肾上腺髓质、交感神经、副神经节的嗜铬细胞合成和分泌的单胺类神经递质，是具有较强的生理学活性的内源性物质，在大脑和神经信号传导中起着重要的作用。儿茶酚胺包括多巴胺（dopamine，DA）、去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）和肾上腺素（epinephrine，E），一般称为儿茶酚胺原型物质，是存在于中枢和外周的神经递质或激素，可作为多种神经内分泌和心血管疾病的筛查、诊断、治疗和预后的重要生物标志物。儿茶酚胺代谢物主要包括甲氧基肾上腺素（metanephrine，MN）、甲氧基去甲肾上腺素（normetanephrine，NMN）、3-甲氧基酪胺（3-methoxytyramine，3-MT）、高香草酸（homovanillic acid，HVA）和香草扁桃酸（vanillylmandelic acid，VMA），其与儿茶酚胺原型物质联合测量时，可提供疾病发展和治疗效果的个性化信息。

儿茶酚胺及代谢产物浓度测定是嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的重要筛查手段，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）方法是国内外指南推荐的检测方法，可同时对儿茶酚胺6种代谢产物进行定量（如表1），检测限可达到pg级别。但是血液和尿液中的儿茶酚胺及代谢产物浓度极低，需要对样本中的待测物进行固相萃取，方可进行检测。

本试剂盒所含磁珠是根据儿茶酚胺及代谢产物等电点和极性分布的特点而专门设计的疏水弱阳离子平衡磁珠（PuriMag HLB-WCX），用于样本中儿茶酚胺及代谢产物的特异性吸附，且具有高比表面积、高悬浮、快速磁分离的特点，特别适合大量样本的快速前处理。

表1 儿茶酚胺代谢产物检测项目和参考范围

项目	缩写	CAS	pKa	LogP^*	参考范围ng/ml
肾上腺素	E	51-43-4	9.69	-0.43	<0.111
去甲肾上腺素	NE	138-65-8	9.50	-0.68	0.07-0.75
多巴胺	DA	51-61-6	10.01	0.030	<0.03
甲氧基肾上腺素	MN	5001-33-2	10.05	-6.81E-04	<0.099
甲氧基去甲肾上腺素	NMN	97-31-4	9.99	-0.39	<0.165
3-甲氧酪胺	3-MT	554-92-9	10.39	0.53	<0.022

二、样品前处理方法

（1）试剂配制

内标工作液：含有40 ng/mL甲氧基肾上腺素‑d3 (MN‑d3)、 40 ng/mL甲氧基去甲肾上腺素‑d3 (NMN‑d3)、40 ng/mL 3‑甲氧酪胺‑d4 (3‑MT‑d4)的0 .1 M的盐酸水溶液。

淋洗液：甲醇或乙腈。

洗脱液：体积比为2:98的甲酸/乙腈混合液(且含10μg/mL的维生素C)。

（2）样品处理流程

步骤1→磁珠的预处理：上下颠倒磁珠悬浮液，混合均匀后取 20 μL磁悬液到1 .5mL离心管中，加入200ul甲醇涡旋振荡30S分散磁珠，磁分离，去除甲醇。加入200 μL纯水。

步骤2→样本的磁固相萃取：取20μL内标工作液和400μL样本加入上述含200μL磁悬液的1 .5mL离心管中，涡旋振荡30S分散磁珠，磁吸30S，去除上清液。

步骤3→淋洗：加入200μL纯水，涡旋振荡30S分散磁珠，磁吸30S，去除上清液。加入200μL甲醇，涡旋振荡30S分散磁珠，磁吸30S，去除上清液。

步骤4→洗脱：加入100μL洗脱液，涡旋振荡30S分散磁珠，磁吸30S，取上清液上机检测。

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