客服热线
15805933710
地址：厦门市集美大道1300号
电话：15805933710
联系人：许先生
QQ：1974707632 (节假日也可咨询)
微信：15805933710 (节假日也可咨询)
邮件：purimag@139.com
【产品介绍】
磁珠法全血、动物组织基因组DNA提取试剂盒是普睿迈格生物科技有限公司最新研制的一款基因组DNA提取试剂盒。本产品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解细菌细胞，释放出基因组DNA，在异丙醇的作用下磁珠选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去磁珠吸附的少量杂质。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。从1ml的菌液中可以获得10~20 µg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。适用于手工细菌基因组DNA的提取，可配合各类磁棒式核酸提取仪或自动化/半自动化工作站。
【特点】
l 耗时少：细菌DNA提取周期在50分钟左右；
l 操作简便：提取过程无需离心；
l 无毒无害：试剂中不含有氯仿，酚等有毒物质；
l 效果稳定：OD260/OD280稳定在1.7-2.0之间，获得细菌基因组DNA的纯度更高；
l 自动化：可以同时处理多个样品，实现全血、动物组织基因组DNA提取的高通量化和自动化。
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存，其余试剂室温保存，有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠（通常需涡旋振荡20秒）。
【试剂盒组成】
组分
100次
保存
Lysis buffer
40 ml
常温
Wash Buffer W1A
48ml （使用前加入32ml无水乙醇）
Wash Buffer W2
80%乙醇（用户自备）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
0.4 ml （选配试剂）
蛋白酶K
异丙醇
用户自备
DNA浓度及纯度检测 ：（1）得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关，所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 （2）DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA，40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9，如果洗脱时使用去离子水，比值会偏低，因为pH和离子会影响吸光度，并不表示纯度低。
【操作步骤】
1. 样品准备
A．血液：取50-200 ul全血于1.5ml离心管中（如果使用白细胞，可2000g离心20分钟，然后小心收集中间的白细胞层）。
注意：本试剂盒适用于新鲜或冻存的使用EDTA、ACD或肝素抗凝血管收集的全血。新鲜血液须保存在4℃，且是7天内收集的血样。冻存血样使用前需重新融化。若纯化DNA用于扩增实验，推荐使用EDTA抗凝血管。
B．组织：取动物组织10mg，尽量剪成小块，充分研磨匀浆。
注意：对不易消化的动物组织，可液氮研磨后再消化；对毛发样本，可剪除毛发根部，毛干部分剪成1~5mm长度；如提取羊水细胞DNA，取10-20ml羊水，13000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀进行消化；如提取精液DNA，取20-200ul精液，于13000rpm离心5分钟，加入500ul的PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7.4) 缓冲液洗涤2次，收集细胞沉淀进行消化。
2. 加入400 μl的Lysis buffer 和20 μl Proteinase K ，涡旋振荡混匀，56℃孵育消化1~3h或过夜，期间涡旋振荡混匀数次，或孵育过程持续振荡，消化效果更好。
注意：肝、心、啮齿动物尾巴、肌肉、大脑、毛囊消化1h；脾虚、肺、肾、耳朵消化2h；皮肤消化3h。样本消化完成后，如有碎片，12000 rpm 离心1 min 去除残留杂质。如需去除RNA ，加入4 μl RNase A 室温放置10 min。
3. 取20ul 的PuriMag bead于200ul异丙醇离心管中，加入上述裂解后液体400-600ul，吹打混摇匀后，静置5min后，磁分离移弃上清；
注意：取用磁珠前请振荡混匀磁珠悬液。对于口腔拭子和干血斑等基因组DNA 含量少的样本，建议使用15 μl的磁珠； 对于肌肉组织等基因组DNA 含量中等的样本，建议使用20 μl的磁珠； 对于鼠的脾脏等基因组DNA 含量高的样本，建议使用30 μl的磁珠。
4. 向离心管加入800ul 的Wash Buffer W1A，吹打混匀后磁分离移弃上清；
5. 向离心管加入800ul的Wash Buffer W2，充分振荡混匀后磁分离移弃上清；重复该步骤一次；将磁珠室温晾干10min，使残留乙醇挥发干净；
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA 。
7. 向离心管中加入100 ul Elution Buffer，充分混匀，置于磁力架上，取上清，即为纯化的基因组DNA，并于适当条件保存。
