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预期用途
PuriMagTM HIC8富集试剂盒（基于磁珠的疏水相互作用色谱法）是为在 MALDI-TOF 质谱分析之前基于疏水相互作用从生物样品中富集蛋白质和肽而开发的。
产品信息
PuriMagTM HIC8：10 mg/ml×1ml，存储于 20%乙醇溶液中。 产品应小心储存和处理，以避免污染。
产品在常温下运输。我们建议到货后将试剂盒存放在 2 - 8°C 环境中。请勿冷冻！
HIC8 缓冲液
Binding buffer (BB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA), NaCl up to 200 mM can be added using HIC8 beads;
Washing buffer (WB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA);
Elution buffer (EB)：Typically 50% ACN in 0.1% TFA.
Note: Fractionation of proteins/peptides is possible by using different concentrations of ACN (e.g. 20%, 50%, 80%)
推荐的生物标志物富集程序
通常，我们推荐以下样品制备方案，但根据样品的种类和应用，可能需要调整此方案。为此，可以改变不同的参数（例如，使用的磁珠量、样品和结合溶液的体积）。
注意：在开始样品制备之前，洗脱缓冲液必须每天新配。对于标准分析实验，建议使用50%乙腈。因此，使用稳定缓冲液稀释 100% 乙腈。
注意：使用稳定缓冲液可显著提高靶标上样品制备的稳定性及采集的谱图质量。由于其稳健性，强烈建议将其用于今后诊断应用。但请注意，在乙腈混合物中用稳定缓冲液代替去离子水会略微改变获得的质谱，从而改变与先前研究相比的重现性。为继续已经开始的研究，使用在去离子水中稀释的50%乙腈。
结合样本到磁珠
1. 从上到下小心摇晃（但不要涡旋或旋转！）磁珠至少 20 次，然后反转以获得均匀的悬浮液。必要时在移液步骤之间重复摇动。
2. 将10 μL 结合缓冲液和最多含有 500 pmol 蛋白的 5μL 样品（例如人血清）转移到标准薄壁 PCR 管中。加入10-20 μL磁珠，上下移液5次，仔细混合溶液。等待1分钟。
注意：必须根据不同的示例进行修改（见下文）
10 μL BB
5 μL Sample
10-20 μL Beads
3.将试管放入磁分离架，等待20秒，将珠子与上清液分离。注意磁珠在管中的运动。
4.使用移液管小心地取出上清液。避免移液器吸头与磁珠接触，并注意不要取出磁珠。
5. 将试管从磁分离架移开。
洗涤结合到磁珠上的样本
6. 洗涤时，加入 100 μL 洗涤缓冲液。
100 μL WB
7. 将试管放入磁力架，并在相邻孔之间来回移动试管 20 次。
8. 等待20秒，在管壁上收集磁珠，然后用移液管小心地取出上清液。
9. 重复步骤 6.-8.两次。
从磁珠上洗脱样本
10. 为了洗脱结合的肽和蛋白质，加入 10 μL 洗脱缓冲液（例如，50% 乙腈或 50% 乙腈的稳定缓冲液）并充分混合。等待 1 分钟。
10 μL EB
11. 将试管放入磁力架，等待 30 秒，将磁珠与洗脱缓冲液分离。
12. 将含有纯化肽/蛋白的洗脱缓冲液转移到新试管中。
13. 继续使用如下所述的适当MALDI-TOF靶标制备方案或适当方法储存样品。
应用文献：
1. Mathias Bruegel, Mathis Planert, Sven Baumann, Almut Focke, Florian Then Bergh, Alexander Leichtle, Uta Ceglarek, Joachim Thiery, Georg Martin Fiedler, Standardized peptidome profiling of human cerebrospinal fluid by magnetic bead separation and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Journal of Proteomics, Volume 72, Issue 4, 2009, Pages 608-615, ISSN 1874-3919, https://doi.org/10.1016/j.jprot.2008.11.018. 2. Katrin Sparbier, Thomas Wenzel, Markus Kostrzewa, Exploring the binding profiles of ConA, boronic acid and WGA by MALDI-TOF/TOF MS and magnetic particles, Journal of Chromatography B, Volume 840, Issue 1, 2006, Pages 29-36, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2006.06.028.
