一、材料

哺乳动物新鲜组织。

二、设备

移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。

三、试剂

1、分离缓冲液：10mmol/L Tris•Cl pH7.4，10mmol/L NaCl，25mmol/L EDTA。

2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。

四、操作步骤

1.切取组织5g左右，剔除结缔组织，吸水纸吸干血液，剪碎放入研钵(越细越好)。

2.倒入液氮，磨成粉末，加10ml分离缓冲液。

3.加1ml 10% SDS，混匀，此时样品变得很粘稠。

4.加50μl或1mg 蛋白酶 K，37℃保温1-2小时，直到组织完全解体。

5.加1ml 5mol/L NaCl，混匀，5000rpm离心数秒钟。

6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后，3000rpm离心 5分钟。

7.取上层水相至干净离心管，加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。

8.移去上层乙醚，保留下层水相。

9.加1/10 体积3mol/L NaAc，及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。

10.用玻棒钩出DNA沉淀，70%乙醇中漂洗后，在吸水纸上吸干，溶解于1ml TE中，-20℃保存。

11.如果DNA溶液中有不溶解颗粒，可在5000rpm短暂离心，取上清; 如要除去其中的RNA，可加5μl RNaseA(10μg/μl)，37℃保温30分钟，用酚抽提后，按步骤9-10重沉淀DNA。

五、Purimag磁珠用于提取DNA

使用Purimag的核酸提取磁珠，可以高效提取植物组织DNA。通常在经典方法沉淀DNA步骤之前加入磁珠，即可让DNA吸附在PuriMag磁珠表面，洗脱后即可得到高纯度的DNA。