一、材料

水稻幼苗或其它禾本科植物，幼嫩叶子。

二、设备

移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。

三、试剂

1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris•Cl，pH8.0，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。

2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240μl巯基乙醇，加水至300ml。

3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇

4、RnaseA母液

5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。

四、操作步骤

（一）水稻幼苗或其它禾木科植物DNA提取

1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ，60℃水浴预热。

2.水稻幼苗或叶子5-10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30-60分钟(时间长，DNA产量高)，不时摇动。

3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀(需带手套，防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟，使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。

4.室温下5000rpm离心5分钟。

5.仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。

6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。

7.如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管。

9.加入5μl RNaseA(10μg/μl)，37℃ 10分钟，除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

10.加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇，混匀，-20℃放置20分钟左右，DNA形成絮状沉淀。

11.用玻棒捞出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干净吸水纸上吸干。

12.将DNA重溶解于1ml TE，-20贮存。

13.取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳，检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍，测定OD260/OD280，检测DNA含量及质量。

[注意] 5g样品可保证获得500μg DNA，足供RFLP、PCR等分析之用。

（二）.从李(苹果)叶子提取DNA

1.取3-5克嫩叶，液氮磨成粉状。

2.加入提取缓冲液Ⅱ10ml，再研磨至溶浆状。10000rpm，10min。

3.去上清液，沉淀加提取液Ⅰ20ml，混匀。65℃，30-60min，常摇动。

4.同本节（一）中步骤3-13操作。

（三）.Purimag磁珠用于提取DNA

使用Purimag的核酸提取磁珠，可以高效提取植物组织DNA。通常在经典方法沉淀DNA步骤之前加入磁珠，即可让DNA吸附在PuriMag磁珠表面，洗脱后即可得到高纯度的DNA。