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预期用途
PuriMagTM IMAC-Cu（基于磁性微球的固定化金属离子亲和色谱）适用于在进行 MALDI-TOF 质谱分析之前，从生物样品富集蛋白质和肽段。本试剂盒仅供研究使用，不可用于诊断程序。
产品信息
PuriMagTM IMAC-Cu：10 mg/ml×1ml，存储于 20%乙醇溶液中。 产品应小心储存和处理，以避免污染。
产品在常温下运输。我们建议到货后将试剂盒存放在 2 - 8°C 环境中。请勿冷冻！
IMAC 缓冲液
Binding buffer (BB): 1 M glycolic acid in 80% acetonitrile (ACN) and 5% trifluoroacetic acid (TFA)；
Washing buffer (WB): 80% ACN, 1% TFA；
Elution buffer A (EBA): 1% NH4OH；
Elution buffer B (EBB): 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) 20 mg/mL in 50% ACN, 1% phosphoric acid (PA)。
推荐的生物标志物富集程序
通常，我们推荐以下样品制备方案，但根据样品的种类和应用，可能需要调整此方案。为此，可以改变不同的参数（例如，使用的磁珠量、样品和结合溶液的体积）。
样品与磁珠结合
1. 将磁珠充分涡旋至少 1 分钟，以获得均匀的悬浮液。
这一步骤有助于确保磁珠在溶液中均匀分布，以便后续与样品充分接触和结合。
2. 用 50μl BB 预处理 20-40 μl 磁珠。
预处理可以使磁珠处于适宜的结合状态。
3. 将管子再次放入磁分离器中。在磁分离器的相邻孔之间来回移动管子 10 次。（注意管中磁珠的移动。）
这种移动有助于磁珠与缓冲液充分作用。
4. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。以便后续去除上清液。
5. 用移液器小心地弃去上清液。去除未与磁珠结合的多余缓冲液。
6. 重复步骤 2 - 5 两次。
进一步确保磁珠的预处理效果。
7. 将磁珠重悬于 20μl BB 中。
8. 加入 5μl 样品（例如人血清），通过移液器上下吹吸五次小心混合。
确保样品与磁珠充分接触。
9. 在室温下保持 5 分钟。
给予足够的时间让样品与磁珠结合。
10. 将管子放入磁分离器中，等待 20 秒，将磁珠与上清液分离。
11. 用移液器小心地弃去上清液。
结合到磁珠上的样品的洗涤
12. 为了洗涤，加入 100μl WB。
13. 将管子再次放入磁分离器中。在磁分离器的相邻孔之间来回移动管子 10 次。（注意管中磁珠的移动。）
14. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。
15. 用移液器小心地弃去上清液。
16. 重复步骤 12 - 15 两次。
多次洗涤以去除未结合的杂质。
结合到磁珠上的样品的洗脱
17. 为了洗脱，加入 10μl EB（EBA 或 EBB）并充分混合。
18. 等待 5 分钟。
19. 使结合在磁珠上的目标物充分洗脱。
20. 将管子放入磁分离器中，等待约 20 秒，将磁珠与管壁上的洗脱液分离。
21. 将含有纯化的肽/蛋白质的洗脱液转移到新的管子中。
按照下面所述的适当的 MALDI - TOF 靶制备方案进行，或适当储存您的样品。
应用文献：
1. Mathias Bruegel, Mathis Planert, Sven Baumann, Almut Focke, Florian Then Bergh, Alexander Leichtle, Uta Ceglarek, Joachim Thiery, Georg Martin Fiedler, Standardized peptidome profiling of human cerebrospinal fluid by magnetic bead separation and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Journal of Proteomics, Volume 72, Issue 4, 2009, Pages 608-615, ttps://doi.org/10.1016/j.jprot.2008.11.018.
2. Pakharukova, N.A., Pastushkova, L.K., Trifonova, O.P. et al. Optimization of serum proteome profiling of healthy humans. Hum Physiol 35, 350–356 (2009). https://doi.org/10.1134/S0362119709030116
3. Peter Findeisen, Diamandula Sismanidis, Martin Riedl, Victor Costina, Michael Neumaier, Preanalytical Impact of Sample Handling on Proteome Profiling Experiments with Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 51, Issue 12, 1 December 2005, Pages 2409–2411, https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.054585
4. Ziganshin, R.H., Alexeev, D.G., Arapidi, G.P. et al. Serum proteome profiling for diagnostics of ovarian cancer using ClinProt magnetic technique and MALDI-TOF mass spectrometry. Biochem. Moscow Suppl. Ser. B 2, 335–342 (2008). https://doi.org/10.1134/S1990750808040021
5. Georg Martin Fiedler, Sven Baumann, Alexander Leichtle, Anke Oltmann, Julia Kase, Joachim Thiery, Uta Ceglarek, Standardized Peptidome Profiling of Human Urine by Magnetic Bead Separation and Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 53, Issue 3, 1 March 2007, Pages 421–428, https://doi.org/10.1373/clinchem.2006.077834
6. Yang, J., Zhu, J., He, K., Zhao, L.-Y., Liu, L.-Y., Song, T.-S. and Huang, C. (2015), Proteomic Profiling of Invasive Ductal Carcinoma (IDC) using Magnetic Beads-based Serum Fractionation and MALDI-TOF MS. J. Clin. Lab. Anal., 29: 321-327. https://doi.org/10.1002/jcla.21773
