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订购信息
货号
规格
MS-SAX001
1 ml
MS-SAX010
10 ml
1. 产品描述
MagStart-SAX（强阴离子交换剂）是一种专有磁性聚合物微粒，设计用于生物分子的分离、纯化和回收，例如蛋白质/肽、酶、抗体、DNA 或 RNA 。通过利用静电荷的差异，这些生物分子通常表现带负电荷，并容易且可逆地吸附到带正电荷的MagStart-SAX微粒。
MagStart的技术有别于传统的固相载体或微珠技术在于它是一种超多孔聚合物微粒，允许生物分子渗透和结合的网络遍布整个微粒体积中，导致非凡的生物分子结合的能力。高官能团密度允许多点连接和结合，从而实现靶生物分子的强离子结合。这一进步将吸附容量转化为数量级的改进，性能优于其他技术。MagStart-SAX 非常适合1D 或 2D电泳、 HPLC或质谱之前，复杂生物混合物的分馏（例如培养上清液、血清或血浆）。MagStart可快速磁分离（<10 秒），通过磁压缩减少了洗涤和洗脱过程中颗粒间隙，从而提高了效率和回收率，强磁性还可防止微粒的意外丢弃而避免样品损失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Fractionation/purification of proteins, peptides, enzymes, antibodies, DNA, RNA
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Quaternary ammonium
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4–8⁰C until expiry date on label DO NOT FREEZE
注意：不当储存、微粒干燥、细菌污染或离心回收可能导致容量/性能的不可逆损失。使用前应充分混匀。
2. 结合流程
生物分子基于阴离子交换吸附结合分析中，结合缓冲液的离子强度要低，结合溶液的pH值应至少高于目标生物分子的等电点 （pI）1单位。当 pH值高于 pI 时，生物分子将带负电荷并将吸附到阴离子交换剂的阳性基团（季铵）上。
图1. 三种不同生物分子的理论滴定曲线表明表面净电荷的pH依赖性
注意：所有试剂都应是新鲜制备的分析级，确保最佳性能。下面描述的缓冲溶液作为一个例子，并非限制。MagStart-SAX 与一系列不同的缓冲液兼容，用于结合/吸附和洗脱/解吸。
2.1. MagStart-SAX胺平衡
MagStart-SAX以 20 mg/ml悬浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除运输溶液，并在结合缓冲液（例如 50 mM Tris，pH8.0）中平衡微粒。可根据推荐的方案按比例放大或缩小以满足您的要求。当前方案估计结合 ~1 mg 蛋白质。
1）通过涡旋混合3秒将MagStart-SAX彻底重悬，以确保悬浮液均匀。
2）将 50 μl （1 mg） MagStart-SAX转移到新离心管中。我们建议使用低结合试管。
3）磁分离，吸弃上清溶液。
4）在250 μl结合缓冲液中（50 mM Tris or triethanolamine, pH 8.0.）洗涤/平衡微粒1分钟。
5）磁分离，吸出上清液。
6）重复步骤4）和5）两次，总共洗涤三次。
7）去除缓冲液后，磁珠即可用于生物分子结合。
2.2. 蛋白质结合流程
蛋白质样品制备后，建议通过0.2 μm过滤器过滤所有样品或以10,000×g离心5分钟，去除可能干扰生物分子结合的颗粒。
1）将含有最多 1 mg 总蛋白的蛋白质样品（在合适的结合缓冲液中）添加到平衡的 MagStart-SAX 中。用结合液将总反应体积调节至至少250 μl，并通过移液或涡旋3秒充分混合。
注意：为确保结合，蛋白质必须处于兼容的结合缓冲液中;可以使用PD-10色谱柱或类似物将蛋白质样品缓冲液置换到合适的缓冲液中。
2）让蛋白质在室温下与微粒结合5-10分钟。连续混合以确保结合过程中样品与微粒的良好互作。
3）将试管放在磁选机上，让微粒清除。通过移液吸除上清。上清可以丢弃或用于蛋白质定量。
4）加入至少250 μl结合缓冲液以洗涤微粒，并通过涡旋混合重悬3秒。
5）磁分离回收磁珠。在管子就位的情况下反转磁铁，清液冲洗卡在管盖中的微粒以完全收集磁珠。
6）用移液管除去上清液。上清液可以丢弃或用于蛋白质定量。
7）重复步骤4-6两次，共洗涤三次。
2.3. 蛋白质洗脱程序
吸附的蛋白质/肽混合物可以通过缓冲液盐浓度增加或pH值降低逐步洗脱进行分馏。
2.3.1. 分馏：增加盐浓度
1）将微粒与2.2吸附的蛋白质/肽混合物重悬于50μl洗脱缓冲液（例如50mM Tris pH 8.0, 50mM NaCl）中，并在室温下解吸2分钟。
2）磁分离，用移液管吸出上清液。保留上清液用于蛋白质定量或进一步分析。
3）重复步骤1和2两次，以提高分离蛋白的回收率。混合等效盐浓度的洗脱液，用于进一步分析。
4）使用盐浓度增加的洗脱缓冲液（例如50 mM Tris pH 8.0，100、150、200或250 mM NaCl等）重复步骤1-3。注意：如需要，洗脱缓冲液的盐浓度可增加到2M NaCl。
5）洗脱的样品含有差异分馏的蛋白质/肽。
2.3.2. 分馏：降低pH值
1）将微粒与2.2吸附的蛋白质/肽混合物重悬于50μl洗脱缓冲液（例如50mM Tris，pH 7.5）中，并在室温下解吸2分钟。
3）重复步骤1和2两次，以提高分离蛋白的回收率。混合等效pH值的池洗脱液用于进一步分析。
4）使用pH值降低的洗脱缓冲液重复步骤1-3（例如，pH 7.0、pH 6.5等下为50 mM Tris）。洗脱的样品现在含有原始蛋白质/肽混合物的差异部分。
3. 常见问题
问题
可能原因
改善方法
蛋白质未如预期那样与微粒结合
弱离子相互作用
降低结合液的离子强度（盐浓度）
不正确的结合pH
检查和调整结合液pH，检查电极校准
蛋白质降解
添加蛋白酶抑制剂
样品或溶液中的干扰物阻止结合
将样品脱盐或透析到推荐的结合液中，以去除培养基成分/其他污染物
微粒数不足
增加颗粒的数量
蛋白质含量过低
通过样品浓度增加蛋白质含量或制备更多起始材料
洗脱过程中蛋白回收率低
离子相互作用太强
增加洗脱缓冲液中的NaCl浓度
pH值太碱性
降低洗脱液pH值，以降低微粒和生物分子间的离子相互作用强度。
蛋白质降解发生在纯化过程中
在样品和缓冲液中加蛋白酶抑制剂以防蛋白水解；使用新制的样品和溶液；缩短制样时间；尽量降低温度。
蛋白在洗脱液中可能不稳定或失活
确定目标蛋白的最佳pH值和盐稳定性
蛋白质分离不足
馏分之间的蛋白质残留
在馏分之间，包括每次 NaCl洗脱之间洗涤步骤，使用较低NaCl浓度增量增加
目标蛋白净电荷与污染蛋白相似
优化样品制备步骤；优化洗脱液NaCl浓度和pH 值。
洗脱后靶蛋白失活
缓冲剂或盐的干扰
通过分馏后透析、过滤、沉淀或体积排阻色谱除去盐。
降低洗脱液浓度或在酸性缓冲液中洗脱，如柠檬酸盐pH3–4；使用NaOH或合适缓冲液洗脱后立即增加pH值。
靶蛋白与下游应用不相容
洗脱使用的 NaCl 或缓冲剂的干扰
通过透析、过滤、沉淀或尺寸排阻去除药剂
