蛋白质纯化用琼脂糖磁性微球(Magarose)选择指南
琼脂糖磁性微球的工作流程非常简单。要获得纯化的蛋白质,只需按照图 1 中描述的六个步骤操作即可。
![琼脂糖磁性微球 琼脂糖磁性微球](/images/image/2024051123110679679.jpg)
图 1:使用磁珠/磁珠的标准蛋白质纯化程序的工作流程。
Magarose琼脂糖磁珠纯化蛋白工作流程:
步骤1:Magarose 蛋白纯化的起点通常是细胞裂解物,细胞裂解液中含有感兴趣的目标蛋白。
步骤2:从储存缓冲液中取出Magarose 琼脂糖磁性微球,并用洗涤缓冲液洗涤两次。向裂解物中加入适量的磁珠。我们建议您使用无菌移液器吸头。
步骤3:缓慢振荡混合 Magarose/蛋白质混合物。没有漩涡! 在室温下持续约 2 小时就足够了。
步骤4:几乎所有感兴趣的蛋白质都应该与Magarose琼脂糖微球结合。同样,重要的是使用比目标蛋白质更多的Magarose琼脂糖微球,以确保最大的结合效果。
步骤5:磁分离Magarose琼脂糖微球,进而将目标蛋白质与裂解物的其余部分分离。对于微量离心管和大规模纯化,我们建议使用实用的PuriMag磁分离器。步骤6:小心移除上清液以避免意外移除某些磁珠。现在用洗涤缓冲液洗涤结合的蛋白质至少两次。
最后,用洗脱缓冲液洗脱蛋白质。用洗脱缓冲液缓慢而稳定地涡旋磁珠,以洗脱所有结合的蛋白质。
自选:额外的洗涤步骤将提高蛋白质的纯度。不同类型的磁珠可能需要不同种类的洗涤缓冲液。要了解如何制备Magarose的相应洗涤缓冲液,请参阅我们的实验方案。磁珠的优点详解
与非磁性亲和基质相比,使用磁珠进行蛋白质纯化具有许多优点。同时,有许多不同的产品具有不同的功能和优势。这个简短的总结将支持您为您的研究找到最佳产品。![](/images/image/20240511231239863986.jpg)
![Magarose琼脂糖磁珠 Magarose琼脂糖磁珠](/images/image/20240511231261096109.jpg)
图2(左或上):磁珠的方案。磁芯都非常一致。图3(右或下):200倍放大倍率下的Magarose磁珠。
磁珠如何纯化蛋白质?
磁珠本身不能与蛋白质相互作用。它必须装满离子。不同的金属离子导致 His 标记蛋白的亲和力和特异性不同。通过亲和层析纯化蛋白质最常用的工具是NTA-Ni配体(图2)。次氮基三乙酸 (NTA) 配体与磁珠等基质偶联,然后加载离子。离子与特定的标记蛋白质相互作用(例如,6 倍的标记蛋白质)。在图4中,镍离子被加载到磁珠中。虽然镍离子是浅蓝色的,但由于磁芯的存在,磁珠呈现黑色。磁芯
用于蛋白质纯化的磁珠包含一个由磁铁矿制成的磁芯,该磁芯覆盖在不同的材料中。磁珠通常是铁磁性(或铁磁性)或超顺磁性的。铁磁/铁磁磁芯通常很大(>30 nm),并显示出强磁矩。即使在磁场消除后,它们仍保留此磁矩。这种效应称为“剩磁”。强磁场导致磁珠在磁场中的快速分离。同时,它们有时会表现出自磁性,并可能附着在金属表面上。默认情况下,PureCube 磁珠是亚铁磁性的。
超顺磁磁性磁芯较小(5-30 nm),磁矩较弱。当外部磁场被移除时,磁珠会失去磁性。磁珠在磁场中的分离通常需要更长的时间或效率较低。同时,便于与金属表面一起使用。如果您需要超顺磁磁珠,请随时与我们联系。
Magarose琼脂糖磁珠属性
对于我们的标准磁珠,我们选择了以下特性,为大多数应用提供最佳结果。但是,如果需要,我们可以提供一系列定制的磁珠。标准品:中等尺寸的磁珠 (20-40 μm),带亚铁磁芯和琼脂糖包衣:用于高蛋白结合、低非特异性结合和高效分离
XL:可提供用于特殊应用的大或超大磁性琼脂糖珠(70-120 μm 或高达 400 μm),也可以使用您选择的亲和配体修饰其他市售磁性载体。 联系我们以了解更多信息。
定制磁珠
如果您对磁珠的需求超出了市场上的常见范围,您可以联系我们并描述您的磁珠在实验中需要哪些特定功能。我们已经完成了大量关于磁珠的定制订单。查看此概述,了解可能的情况。例如,您可能对以下功能感兴趣,需要自定义:
表面化学
磁芯可以覆盖在一系列不同的材料中,提供不同的性能。琼脂糖形成具有中性电荷的三维亲水网。与非磁性琼脂糖类似,它非常适合与蛋白质结合,例如通过亲和配体。较大的相互作用表面导致高结合能力。中性表面减少了非特异性结合。
聚苯乙烯基珠具有羧基化表面,可以相当粗糙(通过添加羧酸盐刷),也可以相当光滑。这两种变体有时都显示出与蛋白质的非特异性结合。它们可用于蛋白质结合的表面积小于琼脂糖包被的微珠,因此它们的尺寸通常较小(1-2μm)以提供相同的结合能力。
二氧化硅微珠最广泛用于核酸纯化。它们在pH值下带负电,并且在蛋白质纯化中通常显示非特异性结合。
大小
磁珠有不同的尺寸,这对处理和纯化结果有影响。小微珠 (1-10 μm):为蛋白质纯化提供高表面积,但磁场较小,会对分离产生负面影响,尤其是从粘性溶液中分离。
中等微珠 (20-40 μm):提供高效分离和大表面积。当与琼脂糖表面结合时,结合能力可以与小聚乙烯基微珠相同。
大微珠 (70-120 μm):在特殊应用中具有优势,例如当纯化方法同时包含磁分离和过滤时。当与琼脂糖表面结合时,结合能力仍然很高。
磁珠产品
PuriMag提供许多不同的Magarose磁珠产品。我们想给您一个简短的概述:您的产品未列出?没问题,我们可以为您制造!
产品
His affinity Ni-NTA, Co-NTA, INDIGO, Ni-IDA |
Phosphopeptide enrichment Fe-NTA, Ti-NTA, Zr-NTA, Al-NTA |
Special IMAC resins Cu-NTA, Zn-NTA |
Custom IMAC resins IDA, NTA |
Activated resins NHS, Maleimide, Carboxy, Epoxy, Amine |
Streptactin |
Glutathione |
Rho1D4 |
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