琼脂糖磁性微球的工作流程非常简单。要获得纯化的蛋白质，只需按照图 1 中描述的六个步骤操作即可。

图 1：使用磁珠/磁珠的标准蛋白质纯化程序的工作流程。

Magarose琼脂糖磁珠纯化蛋白工作流程：

步骤1：Magarose 蛋白纯化的起点通常是细胞裂解物，细胞裂解液中含有感兴趣的目标蛋白。

步骤2：从储存缓冲液中取出Magarose 琼脂糖磁性微球，并用洗涤缓冲液洗涤两次。向裂解物中加入适量的磁珠。我们建议您使用无菌移液器吸头。

步骤3：缓慢振荡混合 Magarose/蛋白质混合物。没有漩涡！ 在室温下持续约 2 小时就足够了。

步骤4：几乎所有感兴趣的蛋白质都应该与Magarose琼脂糖微球结合。同样，重要的是使用比目标蛋白质更多的Magarose琼脂糖微球，以确保最大的结合效果。

步骤5：磁分离Magarose琼脂糖微球，进而将目标蛋白质与裂解物的其余部分分离。对于微量离心管和大规模纯化，我们建议使用实用的PuriMag磁分离器。

步骤6：小心移除上清液以避免意外移除某些磁珠。现在用洗涤缓冲液洗涤结合的蛋白质至少两次。

最后，用洗脱缓冲液洗脱蛋白质。用洗脱缓冲液缓慢而稳定地涡旋磁珠，以洗脱所有结合的蛋白质。

自选：额外的洗涤步骤将提高蛋白质的纯度。不同类型的磁珠可能需要不同种类的洗涤缓冲液。要了解如何制备Magarose的相应洗涤缓冲液，请参阅我们的实验方案。

磁珠的优点详解

与非磁性亲和基质相比，使用磁珠进行蛋白质纯化具有许多优点。同时，有许多不同的产品具有不同的功能和优势。这个简短的总结将支持您为您的研究找到最佳产品。

图2（左或上）：磁珠的方案。磁芯都非常一致。图3（右或下）：200倍放大倍率下的Magarose磁珠。

磁珠如何纯化蛋白质？

磁珠本身不能与蛋白质相互作用。它必须装满离子。不同的金属离子导致 His 标记蛋白的亲和力和特异性不同。通过亲和层析纯化蛋白质最常用的工具是NTA-Ni配体（图2）。次氮基三乙酸 （NTA） 配体与磁珠等基质偶联，然后加载离子。离子与特定的标记蛋白质相互作用（例如，6 倍的标记蛋白质）。在图4中，镍离子被加载到磁珠中。虽然镍离子是浅蓝色的，但由于磁芯的存在，磁珠呈现黑色。

磁芯

用于蛋白质纯化的磁珠包含一个由磁铁矿制成的磁芯，该磁芯覆盖在不同的材料中。磁珠通常是铁磁性（或铁磁性）或超顺磁性的。
铁磁/铁磁磁芯通常很大（>30 nm），并显示出强磁矩。即使在磁场消除后，它们仍保留此磁矩。这种效应称为“剩磁”。强磁场导致磁珠在磁场中的快速分离。同时，它们有时会表现出自磁性，并可能附着在金属表面上。默认情况下，PureCube 磁珠是亚铁磁性的。

超顺磁磁性磁芯较小（5-30 nm），磁矩较弱。当外部磁场被移除时，磁珠会失去磁性。磁珠在磁场中的分离通常需要更长的时间或效率较低。同时，便于与金属表面一起使用。如果您需要超顺磁磁珠，请随时与我们联系。

Fig. 4: To purify proteins different ligands with various ions are coupled to the magnetic bead. This figure shows the example of a Ni-NTA magbead.

Magarose琼脂糖磁珠属性

对于我们的标准磁珠，我们选择了以下特性，为大多数应用提供最佳结果。但是，如果需要，我们可以提供一系列定制的磁珠。
标准品：中等尺寸的磁珠 （20-40 μm），带亚铁磁芯和琼脂糖包衣：用于高蛋白结合、低非特异性结合和高效分离

XL：可提供用于特殊应用的大或超大磁性琼脂糖珠（70-120 μm 或高达 400 μm），也可以使用您选择的亲和配体修饰其他市售磁性载体。 联系我们以了解更多信息。

定制磁珠

如果您对磁珠的需求超出了市场上的常见范围，您可以联系我们并描述您的磁珠在实验中需要哪些特定功能。我们已经完成了大量关于磁珠的定制订单。查看此概述，了解可能的情况。

例如，您可能对以下功能感兴趣，需要自定义：

表面化学

磁芯可以覆盖在一系列不同的材料中，提供不同的性能。
琼脂糖形成具有中性电荷的三维亲水网。与非磁性琼脂糖类似，它非常适合与蛋白质结合，例如通过亲和配体。较大的相互作用表面导致高结合能力。中性表面减少了非特异性结合。
聚苯乙烯基珠具有羧基化表面，可以相当粗糙（通过添加羧酸盐刷），也可以相当光滑。这两种变体有时都显示出与蛋白质的非特异性结合。它们可用于蛋白质结合的表面积小于琼脂糖包被的微珠，因此它们的尺寸通常较小（1-2μm）以提供相同的结合能力。

二氧化硅微珠最广泛用于核酸纯化。它们在pH值下带负电，并且在蛋白质纯化中通常显示非特异性结合。

大小

磁珠有不同的尺寸，这对处理和纯化结果有影响。
小微珠 （1-10 μm）：为蛋白质纯化提供高表面积，但磁场较小，会对分离产生负面影响，尤其是从粘性溶液中分离。
中等微珠 （20-40 μm）：提供高效分离和大表面积。当与琼脂糖表面结合时，结合能力可以与小聚乙烯基微珠相同。

大微珠 （70-120 μm）：在特殊应用中具有优势，例如当纯化方法同时包含磁分离和过滤时。当与琼脂糖表面结合时，结合能力仍然很高。

磁珠产品

PuriMag提供许多不同的Magarose磁珠产品。我们想给您一个简短的概述：您的产品未列出？没问题，我们可以为您制造！

产品

His affinity Ni-NTA, Co-NTA, INDIGO, Ni-IDA

Phosphopeptide enrichment Fe-NTA, Ti-NTA, Zr-NTA, Al-NTA

Special IMAC resins Cu-NTA, Zn-NTA

Custom IMAC resins IDA, NTA

Activated resins NHS, Maleimide, Carboxy, Epoxy, Amine

Streptactin

Glutathione

Rho1D4