磁珠法从鼻/咽拭子转移培养基中提取SARS-CoV-2病毒RNA方案及试剂配方-生物磁珠专家

2020-4-9 22:30:37点击：

新冠疫情全球爆发，为了帮助广大客户更好地利用磁珠从鼻/咽拭子中提取SARS-CoV-2病毒RNA，我们给出如下方案供大家参考优化：

1. 取出200 uL含鼻/咽拭子的病毒转移培养基（VTM），并与100 uL GITC裂解缓冲液合并；

2. 加入20 uL超顺磁珠（PMSi400001, PuriMag）+ 270 uL异丙醇，用移液器混合4-6次，等待1分钟，使RNA与磁珠结合；

注意：磁珠和异丙醇可以预混以改善工作流程。

3. 将板放在磁力架上约2分钟至溶液澄清。

4. 去除上清液；

注意：去除上清液时，将移液器吸头放在板的底部，以便可以吸出所有液体。

5. 用150 uL异丙醇洗涤磁珠一次。

注意，清洗是指先将异丙醇添加到板上（同时放在磁力架上），静置约30秒钟，然后再去除异丙醇。

6. 用200 uL 70％乙醇洗涤；

7. 重复步骤6；

8. 放在磁力架上干燥5分钟（但不要放置太久，因为完全干燥/片状的珠子很难重悬）；

9. 重悬于20 uL 超纯水中，放置1分钟；

10. 再次放在磁力架上至溶液澄清；

11. 将5 uL上清（含模板RNA）转移到新板中进行逆转录和qPCR。

GITC 裂解缓：

GITC 6 M，

Tris HCl pH 7.6-8.0 50 mM，

Sarkosyl 2%，

EDTA 20 mM，

Antifoam 0.1%

病毒转移培养基（VTM）：

Gibco Hanks 860 mL

10% BSA 100 mL (final conc. 1%)

Amphotericin B 10 mL

Penicillin 10 mL

pH 7.2-7.4

Gibco Hanks Solution：

10×Gibco Hanks balanced Salt Solution 200 mL

MilliQ H₂O 770 mL

0.4% phenol red 5 mL

磁珠

本公司提供RNA提取磁珠 PMSi400001, PuriMag

REFERENCES