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磁珠法从鼻/咽拭子转移培养基中提取SARS-CoV-2病毒RNA方案及试剂配方

2020-4-9 22:30:37点击:

新冠疫情全球爆发,为了帮助广大客户更好地利用磁珠从鼻/咽拭子中提取SARS-CoV-2病毒RNA,我们给出如下方案供大家参考优化:

1. 取出200 uL含鼻/咽拭子的病毒转移培养基(VTM),并与100 uL GITC裂解缓冲液合并;

2. 加入20 uL超顺磁珠(PMSi400001, PuriMag+ 270 uL异丙醇,用移液器混合4-6次,等待1分钟,使RNA与磁珠结合;

注意:磁珠和异丙醇可以预混以改善工作流程。

3. 将板放在磁力架上约2分钟至溶液澄清。

4. 去除上清液;

注意:去除上清液时,将移液器吸头放在板的底部,以便可以吸出所有液体。

5. 用150 uL异丙醇洗涤磁珠一次。

注意,清洗是指先将异丙醇添加到板上(同时放在磁力架上),静置约30秒钟,然后再去除异丙醇。

6. 用200 uL 70%乙醇洗涤;

7. 重复步骤6

8. 放在磁力架上干燥5分钟(但不要放置太久,因为完全干燥/片状的珠子很难重悬);

9. 重悬于20 uL 超纯水中,放置1分钟;

10. 再次放在磁力架上至溶液澄清;

11. 将5 uL上清(含模板RNA)转移到新板中进行逆转录和qPCR

GITC 裂解缓:

GITC 6 M,

Tris HCl pH 7.6-8.0 50 mM,

Sarkosyl 2%,

EDTA 20 mM,

Antifoam 0.1%


病毒转移培养基(VTM):

Gibco Hanks 860 mL

10% BSA 100 mL (final conc. 1%)

Amphotericin B 10 mL

Penicillin 10 mL

pH 7.2-7.4


Gibco Hanks Solution

10×Gibco Hanks balanced Salt Solution 200 mL

MilliQ H2O 770 mL

0.4% phenol red 5 mL


磁珠

本公司提供RNA提取磁珠 PMSi400001, PuriMag


REFERENCES

Corman, V.M., Landt, O., Kaiser, M., Molenkamp, R., Meijer, A., Chu, D.K., Bleicker, T., Brünink, S., Schneider, J., Schmidt, M.L. and Mulders, D.G., 2020. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Eurosurveillance, 25(3).