技术支持
你的位置：首页 > 技术支持 > DNA/RNA提取

实验常用试剂、缓冲液的标准配制方法

来源：生物磁珠专家 2019-6-11 22:34:27      点击：

1、1M Tris-HCl            □组份浓度1 MTris-HCl
（pH7.4，7.6，8.0）   □配制量1L
    □配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
                         2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                         3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
                                                        pH值                      浓HCl 
                                                        7.4                         约70mL
                                                        7.6                         约60mL
                                                        8.0                         约42mL
                        4. 将溶解定容至1L。 
                       5. 高温高压灭菌后，室温保存。                           

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 


2、1.5 MTris-HCl    □组份浓度1.5 MTris-HCl
    （pH8.8）            □配制量1L
        □配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
                           2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                           3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
                            4. 将溶液定容至1L。
                          5. 高温高压灭菌后，室温保存。 
       注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 


3、10×TE Buffer        □组份浓度100 mMTris-HCl，10 mMEDTA
（pH 7.4，7.6，8.0）  □配制量1L
 □配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                              1 MTris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL
                            500 mMEDTA（pH8.0） 20mL
                      2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
                     3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
                     4. 室温保存。 


4、3 M 醋酸钠     □组份浓度3 M醋酸钠
    （pH5.2）          □配制量 100mL
    □配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
                          2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
                        3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
                         4. 高温高压灭菌后，室温保存。 


5、PBS Buffer          □组份浓度137 mMNaCl，2.7mMKCl，10 mMNa2HPO4，2 mMKH2PO4
                                □配制量1L

□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                      NaCl                     8 g
                                                      KCl                     0.2g
                                                      Na2HPO4          1.42 g
                                                      KH2PO4             0.27g
       2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
      3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 
       4. 高温高压灭菌后，室温保存。
       注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5 mMMgCl2。 


6、10 M醋酸铵         □组份浓度10 M醋酸铵
                                □配制量 100mL
   □配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
                        2.加去离子水将溶液定容至100mL。
                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
                         4.密封瓶口于室温保存。 
       注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 


7、Tris- HCl平衡苯酚    □配置方法

       1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  
       2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 
       3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 
          ① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 
          ② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 
          ③ 加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。  
          ④ 重复操作步骤③。 
          ⑤ 加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。  
          ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 
          ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 
          ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇  □配置方法

        1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 
        2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 

9、10％（W/V）SDS   □组份浓度 10％（W/V）SDS
                                   □配制量 100mL
    □配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
                        2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
                           3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 


10、2 N NaOH           □组份浓度 2N NaOH
                                 □配制量 100mL 
    □配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 
      2. 称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
     3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。
     4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 


11、2.5 N HCl         □组份浓度 2.5 N HCl
                                  □配制量 100mL
    □配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
                        2. 室温保存。 


12、5 M NaCl         □组份浓度5 MNaCl
                                 □配制量1L
  □配置方法 1. 称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
                    2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
                    3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 


13、20％（W/V）Glucose     □组份浓度 20％（W/V）Glucose 
                                             □配制量 100mL 
 □配置方法 1. 称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
                    2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
                     3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 


14、Solution I            □组份浓度25 mMTris-HCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose
（质粒提取用）        □配制量1L
    □配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
            1MTris-HCl（pH8.0）             25mL
                           0.5 MEDTA（pH8.0）            20mL 
                           20％Glucose（1.11M）           45mL
                              dH2O                                    910mL
                          2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
                          3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。 


15、Solution II           □组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS
（质粒提取用）            □配制量 500mL
   □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        10％SDS                        50mL
                                                         2N NaOH                       50mL 
                      2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
                      3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 
                        注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、Solution III          □组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH
（质粒提取用）           □配制量 500mL
 □配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        KOAc                           147g
                                                        CH3COOH                    57.5mL 
                      2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
                      3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 
                       4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 


17、0.5M EDTA            □组份浓度0.5 MEDTA
       (pH8.0)                  □配制量1L
     □配置方法 1. 称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
                          2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
                          3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。 
                                  注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
                          4. 加去离子水将溶液定容至1L。
                          5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
                           6. 室温保存。 


18、1 M DTT          □组份浓度1 MDTT
                                  □配制量 20mL
          □配置方法 1. 称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。
                             2. 加20mL的0.01 M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
                             3. 适量分成小份后，-20℃保存。 


19、10mM ATP            □组份浓度10mMATP
                                    □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
                    2. 加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
                   3. 适量分成小份，-20℃保存。


分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin             □组份浓度 100mg/ml Ampicillin
（100mg/ml）              □配制量 50mL
 □配置方法 1. 称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。
                       2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
                       3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
                       4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 


2、IPTG                    □组份浓度 24mg/mL IPTG
（24mg/mL）             □配制量 50mL
     配置方法 1. 称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
                      2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
                     3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 
                     4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 


3、X- Gal                  □组份浓度 20mg/mL X- Gal
（20mg/mL）             □配制量 50mL
          □配置方法 1. 称取1gX-Gal置于50mL离心管中。
                             2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
                           3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 


4、LB培养基              □组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl
                                  □配制量1L
       □配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                        Tryptone                          10g
                                                         Yeast Extract                   5g 
                                                         NaCl                              10g
                            2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                           3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
                            4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 


5、LB/Amp培养基     □组份浓度  1％（W/V）        Tryptone
                                                     0.5％（W/V）     Yeast Extract
                                                     1％（W/V）        NaCl
                                                     0.1mg/mL            Ampicillin
                                 □配制量1L
        □配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                       Tryptone                     10g
                                                       Yeast Extract                5g
                                                       NaCl                           10g
                              2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                          3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
                            4. 加去离子水将培养基定容至1L。 
                          5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
                           6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。
                                                    7.4℃保存。 


6、TB培养基             □组份浓度     1.2％（W/V）       Tryptone
                                                       2.4％（W/V）      Yeast Extract
                                                       0.4％（V/V）        Glycerol 
                                                       17mM                   KH2PO4
                                                      72mM                   K2HPO4 
                                  □配制量1L
      □配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。
                           2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                       Tryptone                          12g 
                                                       Yeast Extract                    24g
                                                       Glycerol                              4mL 
                   3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                  4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
                  5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
                 6.4℃保存。 


7、TB/Apm培养基    □组份浓度 1.2％（W/V）    Tryptone 
                                                  2.4％（W/V）    Yeast Extract
                                                  0.4％（V/V）      Glycerol
                                                  17mM                 KH2PO4
                                                 72mM                 K2HPO4
                                                  0.1mg/mL           Ampicillin 
                                 □配制量1L
□配置方法

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                      Tryptone                        12g
                                                      Yeast Extract                 24g 
                                                      Glycerol                           4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

 5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。
 6. 均匀混合后4℃保存。 


8、SOB培养基         □组份浓度 2％（W/V）       Tryptone
                                                  0.5％（W/V）    Yeast Extract
                                                  0.05％（W /V） NaCl
                                                 2.5mM               KCl
                                                10mM                 MgCl2 
                                □配制量1L
   □配置方法

1. 配制250mMKCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。
2. 配制2MMgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 
                                                     Tryptone                       20g
                                                     Yeast Extract                 5g
                                                     NaCl                            0.5g
4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5 量取10mL250 mMKCl溶液，加入到烧杯中。 
6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L。
8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
    9. 使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。 


9、SOC培养基         □组份浓度    2％（W/V）          Tryptone
                                                    0.5％（W/V）             Yeast Extract
                                                    0.05％（W /V）          NaCl 
                                                    2.5mM                          KCl
                                                   10mM                           MgCl2
                                                   20mM                           葡萄糖
                               □配制量 100mL
 □配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

3.4℃保存。 


10、2×YT培养基    □组份浓度 1.6％（W/V）Tryptone， 1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl
                               □配制量1L
  □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                    Tryptone                         16g
                                                    Yeast Extract                   10g 
                                                    NaCl                                 5g
                       2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                       3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。
                       4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                       5. 高温高压后，4℃保存。 


11、Φb×broth培养基 □组份浓度 2％（W/V）Tryptone， 0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O
                                    □配制量1L 
        □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                         Tryptone                     20g
                                                         Yeast Extract               5g
                                                         MgSO4•7H2O                5g 
                       2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。            

3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
                        4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                       5. 高温高压后，4℃保存。 


12、NZCYM培养基  □组份浓度    0.5％（W/V）        Yeast Extract
                                                    0.1％（W/V）        Casamino Acid
                                                   1％（W /V）           NZ胺
                                                   0.5％（W /V）        NaCl 
                                                   0.2％（W /V）        MgSO4•7H2O
                               □配制量1L
           □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                    Yeast Extract                 5g 
                                                    Casamino Acid               1g
                                                    NZ胺                           10g
                                                    NaCl                             5g
                                                    MgSO4•7H2O                 2g
                    2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。
                  4. .加水离子水将培养基定容至1L。
                  5. 高温高压后，4℃保存。 


13、NZYM培养基      □组份浓度     0.5％（W/V）        Yeast Extract
                                                     1％（W /V）             NZ胺
                                                     0.5％（W /V）           NaCl
                                                     0.2％（W /V）           MgSO4•7H2O 
 □配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。 


14、NZM培养基       □组份浓度     1％（W /V）       NZ胺
                                                     0.5％（W /V）           NaCl
                                                     0.2％（W /V）           MgSO4•7H2O
□配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。 


15、一般固体培养基的  □配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。
       配制            Agar（琼脂：铺制平板用）             15g/L
                         Agar（琼脂：配制顶层琼脂用）        7g/L
                     Agarose（琼脂糖：铺制平板用）    15 g/L
                       Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L
                2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。  
               3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
              4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。 


16、LB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度      1％（W /V）            Tryptone 
       平板培养基                      0.5％（W/V）          Yeast Extract
                                                1％（W/V）              NaCl
                                              0.1mg/mL                 Ampicillin
                                               0.5％（W /V）          IPTG
                                                0.04mg/mL                X-Gal
                                               1.5％（W /V）           Agar
                                       □配制量1L
  □配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                             Tryptone                       10g 
                                                             Yeast Extract                  5g
                                                              NaCl                           10g
                      2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                     3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 
                     4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
                    5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
                    6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 
                   7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。
                   8.4℃保存平板。 


17、TB/Amp/X-Gal/IPTG  □组份浓度   

 1.2％（W /V）             Tryptone
  平板培养基   2.4％（W/V）              Yeast Extract
                          0.4％（W/V）               Glycerol 
                         17mM                           KH2PO4
                       72mM                           K2HPO4
                        0.1mg/mL                     Ampicillin
                           0.024mg/mL                  IPTG 
                         0.04mg/mL                    X-Gal
                        1.5％（W /V）                Agar
   □配制量1L
  □配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。
                       2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。 
                                                              Tryptone                      12g 
                                                              Yeast Extract             24g
                                                          Glycerol                        4mL
                       3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
                       4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
                        5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
                        6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 
                        7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 
                        8.4℃保存平板。


生物化学实验常用试剂的配制方法

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L
                                                 □配制量     2L
             □配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。
                                   2.用去离子水溶解并稀释至2L。 


2、0.5mol/L盐酸溶液          □组份浓度   0.5mol/L
                                                 □配制量      2L
             □配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。
                                 2.用去离子水稀释至2L。


4、0.2％葡萄糖标准溶液      □组份浓度 0.2％
                                                  □配制量1L 
   □配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。
                       2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。
                        3.准确称取葡萄糖2.000g。
                        4.用去离子水溶解并定容至1L 
                        5.于4℃保存。


5、250μg/mL牛血清             □组份浓度 250μg/mL
白蛋白标准液                          □配制量2L 
   □配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
                         2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
                      3.4℃保存。


6、Folin试剂甲                      

□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，
                                   加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。
                 2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中，
                                   加入0.25g硫酸铜•5水，溶解。
                   3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。
                   4.4℃保存，可用一周。


7、Folin试剂乙                      

□配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g，
          钼酸钠•2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，
          浓盐酸25mL，充分混合。
 2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。
 3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
 4.于棕色瓶中保存，可使用多年 
注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备  液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。


 8、DNS试剂                           

□配置方法 1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂）                      

2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。

3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。


 9、5％蔗糖溶液                  □组份浓度 5％
                                               □配制量1L
              □配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。


 10、0.1mol/L蔗糖溶液      □组份浓度 0.1mol/L 
                                               □配制量1L
                                               □配置方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。


11、20％乙酸溶液             □组份浓度 20％
                                              □配制量1.2L
    □配置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。


 12、30％（W/V）Acrylamide   

□组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％
 □配制量1L
 □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                 Acrylamide  290g 
                                                  BIS                   10g
             2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 
             3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
             4.于棕色瓶中4℃保存。
      注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，
                其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无
                毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。


 13、40％（W/V）Acrylamide    

 □组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％
 □配制量1L
   □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                  Acrylamide    380g
                                                  BIS                    20g
                       2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解
                       3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。 
                       4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。


14、10％（W/V）过硫酸铵       

  □组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 
 □配制量      10mL
  □配置方法 1.称取1g过硫酸铵。
                       2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
                       3.贮存于4℃。
  注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，
              超过期限会失去催化作用。


15、考马斯亮蓝R-250染色液

□组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇，
                                                                            10％（V/V）冰醋酸
                                                      □配制量      1L
      □配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。
                           2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
                           3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。
                          4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。
                           5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。


16、考马斯亮蓝染色脱色液    

□组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇
   □配制量1L
   □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                         醋酸     100mL
                                        乙醇        50mL 
                                           dH2O     850mL
              2.充分混合后使用。


17、凝胶固定液                       

 □组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量100L

 □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                             甲醇   500mL
                                            醋酸 100mL 
                                            dH2O 400mL
                     2.均匀混合后室温保存。


18、凝胶处理液                        

□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛
(SDS-PAGE银氨染色用)          □配制量1L
 □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                           甲醇       50mL
                                            戊二醛   10mL 
                                             dH2O     40mL
                      2. 均匀混合后室温保存。


19、凝胶染色液                       

□组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水，
      (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠
                                                     □配制量     100L
 □配置方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。
                                      20％硝酸银 2mL
                                              浓氨水 1mL
                                    4％氢氧化钠 1mL
                                                  dH2O 96mL 
         2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 
            会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。
        3.本染色液应现用现配，不宜保存。 


20、显影液                                

□组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量1L
                   □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。
                                                                                       柠檬酸 50mg
                                                                                           甲醛 0.2mL 
                                      2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。
                                      3.室温保存。 


21、45％乙醇溶液                   □组份浓度 45％ 
                                                    □配制量1L 
   □配置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。


22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5％
       （W/V）                                   □配制量0.1L

配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。


23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂

配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。 


24、1.6％乙醛溶液                     □组份浓度 1.6％
                                                       □配制量0.1L
       □配置方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。


25、二苯胺试剂                          

□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中， 
                     2.再加入8mL高氯酸混匀。
                     3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。 
                    注意：配制完成后试剂应为无色。


26、15％三氯乙酸溶液              □组份浓度 15％ 
                                                       □配制量        2L
  □配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 


27、1％谷氨酸溶液                    □组份浓度 1％
                                                       □配制量      0.5L 
         □配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
                           2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                            3. 最后用去离子水定容至0.5L。


28、1％丙酮酸溶液                    □组份浓度     1％
                                                       □配制量     0.5L
           □配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 
                                2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                                3. 最后用去离子水定容至0.5L。


29、0.1％的碳酸氢钾溶液       □组份浓度 0.1％ 
                                                     □配制量     0.5L
           □配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。


30、0.05％的碘乙酸溶液       □组份浓度 0.05％
                                                    □配制量0.25L
       □配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。


31、Locke氏溶液                    □配制量2L
配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾,48g氯化钙,0.3g碳酸
                  氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。


32、0.2mol/L的丁酸溶液      □组份浓度 0.2mol/L
                                                   □配制量1L
         □配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。
                              2.用1mol/L的氢氧化钠中和。
                              3.再用去离子水定容至1L。


33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L
                                                           □配制量     10L 
     □配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。


34、0.1mol/L的碘溶液          □组份浓度 0.1mol/L
                                                   □配制量1L
     □配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。
                         2.用去离子水溶解并定容至1L。 
                                 3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 


35、10％氢氧化钠溶液           □组份浓度 10％
                                                    □配制量2L
        □配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。


36、10％盐酸溶液                  □组份浓度 10％
                                                   □配制量0.2L
        □配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。


37、0.1％标准丙氨酸溶液      □组份浓度 0.1％
                                                    □配制量0.5L
      □配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。


38、0.1％标准谷氨酸溶液      □组份浓度 0.1％
                                                    □配制量    0.5L 
      □配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。


39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％
                                                         □配制量         1L 
      □配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。


40、酚溶液                                   

□配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。

 
41、0.5％淀粉溶液                      □组份浓度 0.5％
                                                         □配制量    0.1L
        □配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。 


42、对羟基联苯试剂                   

配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中，
                配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮

或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。


生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液      □组份浓度 0.2mol/L
     （pH 6.0）                           □配制量1L 
            □配置方法 1. 称取磷酸氢二钠•12水8.82 g。
                                2. 称取磷酸二氢钠•2水27.34g。
                               3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。
                     注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。


2、洗脱液                                 □组份浓度 0.15mol/L
     （含0.15mol/L氯                □配制量      10L
     化钠的0.005mol/L              □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。
     pH 6.0的磷酸缓冲液）                         2. 用0.2mol/L pH6.0的

磷酸缓冲液250mL溶解。
                                              3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。  


3、0.3mol/L磷酸缓冲液        □组份浓度 0.3mol/L
      （pH7.8）                           □配制量      0.5L
                           □配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠•12水49.150g。
                                                2.磷酸二氢钠•2水2.000g。
                                    3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。
                         注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。


4、0.2mol/L乙酸缓冲液        □组份浓度 0.2mol/L
      （pH4.6）                           □配制量       2L 
                    □配置方法 1.准确称取乙酸钠•3水54.44g。
                                        2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
                                         3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。


5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸      □组份浓度 0.2mol/L
       缓冲液                                □配制量     各1L
     （pH 2.6、4.6、6.6）       

□配置方法  1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4•12水143.256g， 用去离子水定容至2L。
                      2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸•1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。 
                       3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： 
                           pH值 A（mL） B（mL） 
                           2.6     109.0        891.0 
                           4.6      467.5       532.5 
                            6.6       727.5      272.5 
                       4. 按上表混匀后，4℃保存。


6、20×SSC 缓冲液                 □配制量      1L
      （pH7.0）                          □配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。
                                                  2.准确称取88.2g柠檬酸钠•2水。
                                                 3.溶解于800mL去离子水中。
                           4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
                                               5.加去离子水定容至1L。 
                      注意：按实验需要可分装后高压灭菌。
        10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 


7、0.15mol/L氯化钠-                 □组份浓度    0.15mol/L
      乙二胺四乙酸二钠                □配制量      1L
      缓冲液                  □配置方法   1.准确称取氯化钠8.77g。
     （pH8.0）                                     2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
                                                          3. 溶于800mL去离子水中。
                                                    4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。 
                                                   5.加去离子水定容至1L。 


8、1/15mol/L的磷酸盐              □组份浓度 0.15mol/L
       缓冲液                                     □配制量     1L
      （pH7.6）                              

  □配置方法

1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。 
 2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4• 2水11.876g（或磷酸氢二钠•12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。
 3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。


9、5×Tris-GlycineBuffer         □组份浓度0.125MTris，1.25MGlycine，0.5％（w/v）SDS
（SDS-PAGE电泳缓冲液）      □配制量       1L 
  □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                                                   Tris          15.1g
                                                                                   Glycine       94g
                                                                                   SDS           5.0g
                       2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。
                       3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。 


10、5×SDS-PAGE                  □组份浓度250mMTris-HCl（pH6.8）
        Loading Buffer                                    10％（W/V） SDS 
                                                                       0.5％（W/V） BPB 
                                                                       50％（V/V） 甘油 
                                                                       5％（W/V） β-巯基乙醇 
                                                        □配制量         5mL 
            □配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。 
                                                                             1MTris-HCl 1.25mL
                                                                                SDS0.5g
                                                                                BPB 25mg
                                                                                甘油 2.5mL
                                     2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
                                    3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
                                     4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
        5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右