问题

原因

解决办法

DNA带模糊

DNA降解

避免核酸酶污染

电泳缓冲液陈旧

电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

所用电泳条件不适

电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜ 30℃；巨大DNA链电泳，

温度应＜ 15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

DNA变性

电泳前勿加热，用 20mM NaCl缓冲液稀释DNA

不规则DNA带迁移

对于λ/Hind III片段cos位点复性

电泳前于 65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟

电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm；温度＜ 30℃；经常更换电泳缓冲液

DNA变性

以 20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热

带弱或无DNA带

DNA的上样量不够

增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳

灵敏度稍高，上样量可适当降低

DNA降解

避免DNA的核酸酶污染

DNA走出凝胶

缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

对于EB染色的DNA，   

所用光源不合适

应用短波长（254nm）的紫外光源

DNA带缺失

小DNA带走出凝胶

缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

分子大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度

DNA 变性

电泳前请勿高温加热DNA链，以 20mM NaCl Buffer稀释DNA

DNA链巨大

常规凝胶电泳不合适   在脉冲凝胶电泳上分析