I. 用途
PuriMag Si-WCX磁珠是涂有弱阳离子交换表面（WCX）的磁性硅纳米颗粒。磁珠适用于：
● 质谱分析（例如MALDI-TOF分析）和HPLC之前的样品制备和预分级
● 用于多种下游应用的蛋白质和肽分离，例如酶测定
● 去除洗涤剂
● 临床样本的分级，例如血清，血浆，组织，脑脊液，尿液和细胞裂解液
PuriMag Si-WCX磁珠可方便用于手动和自动化工作流程。在外磁场作用下，高磁强度的磁珠通常在1分钟内完全收集。快速和完全分离导致非常好的再现性，因为在洗涤步骤不会损失磁珠。此外，与基于柱子的离子交换色谱相比，蛋白质吸附、解吸和磁性收集的短暂孵育时间通常显著缩短，如HPLC。PuriMag Si-WCX磁珠适用于自动液体处理平台上的96孔微孔板。
产品名称
PuriMag Si-WCX
浓度
20mg / ml
平均尺寸
0.4μm（+/-0.04μm）
材料
硅基磁性材料
磁分离
<30 S
储存
2-8°C软化水中
II．原理
肽和蛋白质与PuriMag Si-WCX磁珠表面上的阴离子基团结合，同时洗去杂质。在解吸缓冲液中洗脱后，纯化的肽和蛋白质可供下游使用。
● 预平衡溶液：0.05 M Ammonium Acetate（AmAc）， pH 4，1M NaCl
● 吸附缓冲溶液：0.05 M Ammonium Acetate， pH 4
● 洗涤液：水（HPLC级）
● MALDI MS的解吸溶液1： 1% TFA水溶液
解吸溶液2： a) 0.05 M AmAc，pH 4，0.2 M NaCl
b) 0.05 M AmAc，pH 4，0.4 M NaCl
c) 0.05 M AmAc，pH 4，0.6 M NaCl
d) 0.05 M AmAc，pH 4，0.8 M NaCl
e) 0.05 M AmAc，pH 4，1 M NaCl
对于缓冲系统，应考虑目标分子的pI。为有效吸附和解吸，吸附和解吸缓冲液的pH应至少比要结合的分子的pI低1个pH单位，但不应超过4个pH单位。
为分析体液如血清，建议在不同pH下测试其它缓冲系统，因为目标分子的pI是未知的。可选吸附缓冲液：
● 50 mM Sodium citrate, pH 5 (with increasing NaCl concentrations as for the AmAc system)
● 50 mM MES, pH 6
● 50 mM sodium phosphate pH
● 50 mM HEPES pH 8
为了更好地处理，可使用0.01%吐温20或0.01%TX100的洗涤剂。但请注意，清洁剂可能会干扰质谱等下游应用。推荐使用高达8mM的正辛基葡糖苷（n-octylglucoside）进行血清分析。
V. 实验使用流程
1）反离子预平衡：涡旋PuriMag Si-WCX磁珠均匀悬浮，将20μl磁珠悬浮液转移至PCR管，磁分离去除上清。从磁铁上取下管子，加入200μl预平衡溶液并重新悬浮，磁分离弃上清，重复洗涤两次。
2）吸附缓冲液平衡磁珠：向磁珠中加入200μl吸附缓冲液，并重新悬浮磁珠，磁分离弃上清。吸附缓冲液重复洗涤两次。
3）蛋白质/肽的吸附：向洗涤过的磁珠中加入含大约10μg蛋白质或肽的样品，吸附溶液总体积200μl。在室温下轻轻摇动磁珠5分钟完成吸附，磁分离弃上清。加入200μl吸附液，洗涤磁珠，弃去上清液。重复洗涤三次。
4）解吸：
A）MS分析的解吸：向磁珠中加入100μl洗涤液并重悬（脱盐步骤），磁分离，弃上清液。向磁珠中加入10μl解吸附溶液1，重新悬浮，磁分离，取出液体至Eppendorf管进行进一步分析。
MALDI分析：通常，将1μl洗脱液和1μl适当MALDI-MS基质的饱和溶液混合（typically, alphacyano-4-hydroxy-cinnamic acid is used for peptides 4000 Da, sinapinic acid is used.）。在MALDI靶上点样1μl混合物产生可靠的光谱。
B） 在天然蛋白质条件下的解吸：将磁珠重新悬浮在20μl解吸附溶液2a （0.05M AmAc, pH 4, 0.2 M NaCl）中。并在室温下孵育2分钟，磁分离并转移上清液。增加解吸溶液2的盐浓度b-e，该解析步。
