预期用途
PuriMagTM IMAC-Cu（基于磁性微球的固定化金属离子亲和色谱）适用于在进行 MALDI-TOF 质谱分析之前，从生物样品富集蛋白质和肽段。本试剂盒仅供研究使用，不可用于诊断程序。
产品信息
PuriMagTM IMAC-Cu：10 mg/ml×1ml，存储于 20%乙醇溶液中。 产品应小心储存和处理，以避免污染。
产品在常温下运输。我们建议到货后将试剂盒存放在 2 - 8°C 环境中。请勿冷冻！
IMAC 缓冲液
Binding buffer (BB): 1 M glycolic acid in 80% acetonitrile (ACN) and 5% trifluoroacetic acid (TFA)；
Washing buffer (WB): 80% ACN, 1% TFA；
Elution buffer A (EBA): 1% NH4OH；
Elution buffer B (EBB): 2,5-Dihydroxybenzoic acid (DHB) 20 mg/mL in 50% ACN, 1% phosphoric acid (PA)。
推荐的生物标志物富集程序
通常，我们推荐以下样品制备方案，但根据样品的种类和应用，可能需要调整此方案。为此，可以改变不同的参数（例如，使用的磁珠量、样品和结合溶液的体积）。
样品与磁珠结合
1. 将磁珠充分涡旋至少 1 分钟，以获得均匀的悬浮液。
这一步骤有助于确保磁珠在溶液中均匀分布，以便后续与样品充分接触和结合。
2. 用 50μl BB 预处理 20-40 μl 磁珠。
预处理可以使磁珠处于适宜的结合状态。
3. 将管子再次放入磁分离器中。在磁分离器的相邻孔之间来回移动管子 10 次。（注意管中磁珠的移动。）
这种移动有助于磁珠与缓冲液充分作用。
4. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。以便后续去除上清液。
5. 用移液器小心地弃去上清液。去除未与磁珠结合的多余缓冲液。
6. 重复步骤 2 - 5 两次。
进一步确保磁珠的预处理效果。
7. 将磁珠重悬于 20μl BB 中。
8. 加入 5μl 样品（例如人血清），通过移液器上下吹吸五次小心混合。
确保样品与磁珠充分接触。
9. 在室温下保持 5 分钟。
给予足够的时间让样品与磁珠结合。
10. 将管子放入磁分离器中，等待 20 秒，将磁珠与上清液分离。
11. 用移液器小心地弃去上清液。
结合到磁珠上的样品的洗涤
12. 为了洗涤，加入 100μl WB。
13. 将管子再次放入磁分离器中。在磁分离器的相邻孔之间来回移动管子 10 次。（注意管中磁珠的移动。）
14. 使磁珠在管壁聚集 20 秒。
15. 用移液器小心地弃去上清液。
16. 重复步骤 12 - 15 两次。
多次洗涤以去除未结合的杂质。
结合到磁珠上的样品的洗脱
17. 为了洗脱，加入 10μl EB（EBA 或 EBB）并充分混合。
18. 等待 5 分钟。
19. 使结合在磁珠上的目标物充分洗脱。
20. 将管子放入磁分离器中，等待约 20 秒，将磁珠与管壁上的洗脱液分离。
21. 将含有纯化的肽/蛋白质的洗脱液转移到新的管子中。
按照下面所述的适当的 MALDI - TOF 靶制备方案进行，或适当储存您的样品。
应用文献：
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2. Pakharukova, N.A., Pastushkova, L.K., Trifonova, O.P. et al. Optimization of serum proteome profiling of healthy humans. Hum Physiol 35, 350–356 (2009). https://doi.org/10.1134/S0362119709030116
3. Peter Findeisen, Diamandula Sismanidis, Martin Riedl, Victor Costina, Michael Neumaier, Preanalytical Impact of Sample Handling on Proteome Profiling Experiments with Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 51, Issue 12, 1 December 2005, Pages 2409–2411, https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.054585
4. Ziganshin, R.H., Alexeev, D.G., Arapidi, G.P. et al. Serum proteome profiling for diagnostics of ovarian cancer using ClinProt magnetic technique and MALDI-TOF mass spectrometry. Biochem. Moscow Suppl. Ser. B 2, 335–342 (2008). https://doi.org/10.1134/S1990750808040021
5. Georg Martin Fiedler, Sven Baumann, Alexander Leichtle, Anke Oltmann, Julia Kase, Joachim Thiery, Uta Ceglarek, Standardized Peptidome Profiling of Human Urine by Magnetic Bead Separation and Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry, Clinical Chemistry, Volume 53, Issue 3, 1 March 2007, Pages 421–428, https://doi.org/10.1373/clinchem.2006.077834
6. Yang, J., Zhu, J., He, K., Zhao, L.-Y., Liu, L.-Y., Song, T.-S. and Huang, C. (2015), Proteomic Profiling of Invasive Ductal Carcinoma (IDC) using Magnetic Beads-based Serum Fractionation and MALDI-TOF MS. J. Clin. Lab. Anal., 29: 321-327. https://doi.org/10.1002/jcla.21773
