近年来,在生命科学领域,为了进一步解析基因功能,蛋白质组学(Proteomics)和多肽组学(peptidomics)研究应运而生。蛋白质组学是在蛋白质层面讨论生命系统之现象,包括特定的细胞、组织、脏器中基因经转录转移而产生之全部蛋白质,可为疾病诊断、动植物育种和新药研发等领域所应用。基于飞速发展的质谱技术分析蛋白质,具有高效、快速、简单等显著特点,因而成为蛋白组学研究的重要工具。在质谱分析前,往往要对样本进行冗繁的前处理,达到浓缩富集目标蛋白的目的,再进行质谱分析。
PuriMag磁珠法蛋白冠前处理试剂盒可以替代传统的蛋白质样本前处理手段用于蛋白组学样本前处理,作为快速解决这一问题的重要工具。试剂盒内的磁珠表面涂覆不同材料,构建具有不同亲疏水特性、电荷特性、反应特性及混合模式特性的磁性颗粒材料,从而展现对不同蛋白或多肽的亲和、吸附、结合能力,在磁核表面形成蛋白冠(Corona)实现对蛋白的分类富集,成为蛋白组学样品前处理的强有力工具。
蛋白多肽组学前处理磁珠,重磅来袭!
试剂盒组成:
Cat.
Particle Description
Material
Volume
(ml)
Zeta potential
(mV)
Pmix01001
Silica coated
SiO2
1 ml
-30 ~ -40
Pmix05003
Dimethylamine function
Polymer
20 ~ 30
Pmix05001
Carboxylated polystyrene
-25 ~ -30
Pmix04002
Hydroxyl HIC
-10 ~ -20
Pmix05006
Polyzwitterion coated HILIC
-20 ~ -30
稀释缓冲液:40 ml
0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl)
实验操作流程:
样品准备
1. 血浆和血清样本用含0.05% CHAPS 的TE 缓冲液 (10mM Tris, 1mM disodium EDTA, 150mM KCl) 按1:5稀释。
磁珠准备
2. 磁性纳米粒子在去离子水中超声10 min 并涡旋2–3 秒 。
孵育
3. 为了形成蛋白冠,100 μL 磁性纳米粒子悬液与 100 μL 稀释的样本在96孔板混合,并于37 °C 下300 rpm孵育1h。
收集磁珠
4. 孵育后,磁分离 5 min ,移去上清液。
洗涤磁珠
5. 用200 μL 稀释缓冲液洗涤磁珠3次,并磁分离去上清。
酶解洗脱
6. 为了水解蛋白冠,采用胰蛋白酶试剂盒 (iST 96×, PreOmics, Germany) 。每孔加入50 μL 裂解缓冲液,并95 °C 搅拌加热 10 min 。冷却到室温后,加入胰蛋白酶消化液,37 °C 振荡孵育 3 h。加入终止液停止消化。磁分离,将上清液移到新管中。用过滤柱 (styrenedivinylbenzene reversed-phase sulfonate [SDB-RPS])过滤,使用75 μL 洗脱液洗脱多肽2次,合并洗脱液,用多肽试剂盒定量。
客户发表论文:
1. Chang Tan, Geng Qin, Qian-Qian Wang, Kai-Min Li, Yuan-Chen Zhou, Shu-Kun Yao. Comprehensive serum proteomics profiles and potential protein biomarkers for the early detection of advanced adenoma and colorectal cancer, World J Gastrointest Oncol, . 2024 Jul 15;16(7):2971-2987. doi: 10.4251/wjgo.v16.i7.2971.
2. Yating Wang et al. Proteomic and metabolomic analysis of plasma for pain at different labor stages, Talanta, 2024, 126905, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2024.126905