一、概述
CNBr 琼脂糖磁珠是PuriMag公司新开发活化好的磁珠，它采用平均粒径为20~45 μm的6%高度交联琼脂糖凝胶，表面用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，用它合成的亲和填料，它避免蛋白之间位阻以及蛋白和填料的位阻干扰，使其同等配基下有更高载量，同时有更好的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒，抗体等大分子的物质，载量基本保持不变。可以在水相或者有机相中偶联。提供的该CNBr 琼脂糖磁珠已活化。
二、产品特性
产品名称
Magarose-CNBr
货号
PMAG011
磁珠浓度
冻干粉
配基密度
~90 μmol CNBr/ ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
20-45μm
配体结合
>20 mg BSA/ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 产品特点
w 偶联条件温和(pH8~10、4~45°C、时间1~16小时)，偶联效率高(每1 mL磁珠可偶联18~30 mg BSA)。
w 填料不需要处理，直接计算合适的量用于偶联。
w 保存时间长，4~8 ℃可以保存一年半，-20℃可以保存2年，同时应该避免受潮。
w 可偶联包含多糖，蛋白，核酸，抗体以及其他含有NH2配基的物质，使用范围广。
2. 蛋白偶联操作步骤
以用该CNBr活化琼脂糖磁珠偶联牛血清白蛋白(BSA)为例：
1) 取BSA 100 mg溶解于10 ml的0.25 M碳酸钠缓冲液中，pH9.0。
2) 将磁珠用0.25 M碳酸钠缓冲液（pH9.0）溶胀后，吸取适量的磁珠，用上述缓冲液洗涤2次。
3) 将5 mL磁珠加入溶解后的BSA 溶液中混合，在摇床上振荡，25℃偶联6小时。
4) 然后加0.1M Tris-HCl，pH8.3，再反应6个小时封闭剩余的基团。
5) 偶联了BSA 的磁珠，用1 M NaCl 溶液洗3-5次，收集偶联后剩余的液体以及洗涤的溶液测定BSA 的总量，再用纯水洗涤磁珠3次，最后将磁珠保存在相应蛋白保存缓冲液中。
6) BSA 的偶联量为25 mg/ml. 计算方法：BSA 的吸附载量=（G0—G1）/V。
G0：BSA 总使用量，单位：mg；
G1：偶联反应后未偶联的 BSA 的量，单位：mg；
V：填料的体积，单位：mL；
备注：该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。
3. 注意事项
1) 活化的填料现取现用，免时间过长造成偶联活性降低。其余的可以密封4~8℃保存1年半，避免潮解。但是最好的-20℃密封保存，这样可以保存放两年。
2) 如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上4°C振摇偶联12~16 小时，以维持配基的活性。如果没有把握可以配相应浓度的配基溶液0.5~1 ml，分别选择不同pH 及温度然后不加填料模拟偶联条件，到时间观察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶联效果就不好，这时可以稍微降低pH 或温度，同时可以加2.5%左右的甘油或PEG 保护蛋白，避免沉淀，总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。
3) 偶联配基后尽快清洗填料，避免在高pH 条件中，配基失活。
4) 更稳定的配基可以直接溶解于NaOH 溶液或者碳酸钠溶液中进行偶联，温度可适当提高，偶联时间则相应缩短至1~4小时。
5) 偶联蛋白的最适pH为可以在8.0~10左右，在室温或4°C均可，温度与pH 的提高均能增加配基的吸附载量，根据蛋白的稳定选择合适的pH 和温度，偶联蛋白溶液的浓度为5~20 mg/ml。磁珠体积和配基溶液的体积为1：1.5 或者为1：2。
6) 偶联的缓冲液包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物质。
7) 偶联的物质如果是小分子的化合物，例如氨基酸或其他带NH2 的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05 M NaOH 或0.5M 碳酸钠溶液中配置成10~20 mg/ml 的溶液，其他条件不变，这样偶联效果更好。
8) 在偶联中要把填料能混匀完全悬浮起来，避免剧烈搅拌使填料有小颗粒降低流速。
9) 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。
