【产品介绍】
磁珠法PCR产物纯化试剂盒是普睿迈格生物科技有限公司最新研制的一种PCR产物纯化试剂盒。本试剂盒是利用磁性纳米分离技术从PCR反应产物及其他酶促反应物中,简单、快速、高效提取纯化高质量DNA,并能有效的除去蛋白质,dNTP,引物等杂质,适用于自动化核酸纯化平台,纯化后的DNA A260/A280的比值在1.7-1.9之间,A260/A230的比值通常在2.0以上,可以应用到各类下游分子生物学实验。
【特点】
l 适用范围广,回收效率高,对于100 bp~50 kb之间的DNA片段回收效率在95%以上。
l 样品体积范围广,不需要离心。
l 操作简单快速,20~30min完成核酸纯化。
l 实现核酸纯化高通量化和自动化。
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的PuriMag Beads置于2-8℃保存,其余试剂室温保存,有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团,从而使磁珠表面积减小,降低样品回收得率,使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠(通常需涡旋振荡20秒)。
l 本试剂盒不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段,如果要回收小于100bp的DNA片段,可将PuriMag PCRbead的用量增加到样品体积的4倍。
【纯化回收得率的计算】
建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算,不建议通过260nm处的光吸收值来计算回收得率。溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯化前的某些杂质在260nm处都有光吸收,这样在计算回收前样品中DNA浓度时会得到一个虚高的DNA浓度值。
【试剂盒组成】
组分
100次
保存
PuriMag PCRbead
4 ml
2-8℃
Wash buffer
75%乙醇(用户自备)
常温
Elution buffer
5 ml
异丙醇
用户自备
DNA浓度及纯度检测 :(1)得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关,所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 (2)DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA,40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时使用去离子水,比值会偏低,因为pH和离子会影响吸光度,并不表示纯度低。
【操作步骤】
结合→
1) 向1.5 ml的离心管或PCR管中加入待纯化的PCR产物, 然后加入2倍样品体积的PuriMag PCRbead,颠倒混匀数次,磁分离后吸弃上清液。
洗涤→
2) 向离心管中加入150 μl Wash buffer,移液枪缓慢吹打混匀,静置1 min,于磁力架上静置20 s,小心吸弃上清液。重复该步骤一次。上清液尽量移除干净,室温晾干5 min,让残留乙醇挥发干净,以免影响后续实验。
洗脱→
3) 向离心管中加入10~50 ul的Elution buffer(Elution buffer在65-70 ℃中预热后洗脱效果更好,减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度),移液枪缓慢吹打混匀1~2 min,将离心管放到磁力架上静置20 s,小心将上清液吸入新离心管中,即为纯化的PCR产物,可存放于2~8 ℃,长期存放需放置于-20 ℃。