1. 概述
PuriMagTM G-NHS功能化磁性纳米粒子是均一的、聚合物包覆的超顺磁纳米粒，亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性、低非特异吸附和易操作性，表面涂有高密度NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）官能团可永久共价偶联含伯胺的配体。表面涂有高密度NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）官能团。配体中的其他活性基团无需在偶联之前进行保护。耦合很快（室温pH 6.5~9下15~30分钟，4℃下4小时）。 PuriMagTM G-NHS磁珠最适合与大蛋白或小肽结合。
NHS磁珠偶联机理：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
NHS group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in Acetone
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：1）以下方案是将含胺的配体与PuriMagTM G-NHS活化的磁珠偶联的示例。强烈建议进行滴定，以优化用于每种单独应用的磁珠量。该方案可以相应地按比例放大和缩小。
2）偶联缓冲液的离子强度对于获得更高的耦合效率至关重要。
3）偶联缓冲液应具有最小的离子强度，并且不应包含任何氨基（例如Tris），但洗涤或储存缓冲液可以包含氨基或羧基。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手动操作）：用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管；用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管
2）偶联缓冲液：10 mM磷酸钾、0.15 M NaCl、pH 5.5（注意：pH 6.5~9可用于偶联，但是在pH〜5.5时可获得最高偶联效率）；
3）洗涤缓冲液：0.05 M Tris-HCl、0.5 M NaCl、pH 8.0；
4）封闭缓冲液：1 M乙醇胺、pH 9；
B. 蛋白质偶联
1）称重并将30 mg磁珠转移到离心管中。
2）将0.5-1 mg蛋白质/肽溶解在1ml偶联缓冲液中。
注意：NHS激活的磁珠的耦合效率因配体而异。使用者应根据经验优化配体的浓度。建议蛋白质结合使用0.5~10 mg / ml。对于小肽，配体的浓度应为每毫升至少200μmol配体。
3）将蛋白质溶液添加到磁珠中。重悬磁珠，并通过移液或涡旋混合非常均匀。在室温下连续旋转孵育反应4~6小时或过夜。
4）将试管放在磁力分离器上1-3分钟。当试管保留在分离器上时，除去上清液。从分离器中取出试管，并用1 ml洗涤缓冲液涡旋悬浮30秒。磁分离，除去上清液。
5）按照步骤4所述，用1 ml洗涤缓冲液（或1 M NaCl）洗涤磁珠3-4次。
6）向PuriMagTM磁珠中添加0.5-1ml封闭缓冲液（珠也可以被PBS，pH7.4、0.1％BSA封闭），在室温下孵育1小时或在4°C下孵育过夜。
7）按照步骤4所述，用1ml冷洗涤缓冲液洗涤磁珠3次。
8）将磁珠重悬于pH 7.4、0.1％BSA和0.1％叠氮化物（w / v）的PBS缓冲液中至所需浓度，并保存在4°C下直至使用。不要冻结。
（本磁珠仅供科研使用！）
