Ordering information
Name
Cat. No.
Vol.
Scheme
G-ProA
PMG013-2
2 ml
G-ProG
PMG014-2
G-ProA/G
PMG029-2
G-ProL
PMG030-2
1. 概述
PuriMag™ Beads通过亲和作用提供了一种快速方便地磁分离抗体的方法。共价连接到封闭磁珠表面的重组蛋白A、蛋白G、蛋白L可以结合来自许多不同物种的抗体，使得能够从粗提取物中纯化抗体。用蛋白A、蛋白G、蛋白L包被的磁珠进行的免疫沉淀测定，背景低，靶抗原的产率高。使用交联剂化学，您可以将抗体固定在磁性颗粒上，并防止IP或Co-IP实验中的IgG污染。蛋白A、蛋白G、蛋白L磁珠通常用于从血清，细胞培养上清液或腹水中分离抗体，并用于免疫沉淀和细胞或组织提取物中抗原的免疫共沉淀。与阻断的磁珠表面共价连接的重组蛋白L通过κ轻链选择性结合小鼠和人抗体。由于蛋白L不结合牛IgG，珠通常用于纯化补充有牛血清的细胞培养上清液中的单克隆抗体。为了纯化抗体，将磁珠与抗体溶液一起温育，然后从上清液中磁分离。为了进行免疫沉淀，将珠子加入到已加入抗体的含抗原样品中并允许孵育以形成抗体 - 抗原复合物。使用洗脱缓冲液将结合的抗体或抗原从珠上解离。用磁力架或自动化仪器将目标纯化物溶液从移出。
PuriMag™ G-ProA磁珠含有每个蛋白质具有5个Fc结合结构域的重组蛋白A（分子量44.7kDa，通过SDS-PAGE约47kDa的表观分子量）。这些结构域可以结合来自许多不同物种的抗体，包括小鼠、人、兔、猪、狗和猫。当使用复杂的生物样品时，磁珠上专有的封闭剂可最大限度地减少或消除磁珠表面的非特异性结合。
PuriMag G-ProG磁珠含有每个蛋白具有2个Fc结合结构域的重组蛋白G（分子量21.6kDa;通过SDS-PAGE约32kDa的表观分子量）。这些结构域可以结合来自许多不同物种的抗体，包括小鼠，人，兔，牛，山羊和绵羊。已经从重组蛋白G中消除了白蛋白和细胞表面结合结构域以减少非特异性结合。另外，当使用复杂的生物样品时，磁珠上专有的封闭剂可以最小化或消除珠粒表面上的非特异性结合。为获得最佳结果提供了详细说明和优化的缓冲区组件。
PuriMag™ G-ProA/G是PuriMag™ G-ProA和PuriMag™ G-ProG按1:1混合所得，兼有两者的性质。
PuriMag G-ProL磁珠含有重组蛋白L（分子量35.8kDa，通过SDS-PAGE约36kDa的表观分子量），每个蛋白质具有4个免疫球蛋白结合结构域。这些结构域可通过κ轻链与蛋白A或蛋白G（包括IgG，IgM，IgA，IgE和IgD）结合至更宽范围的Ig类别。蛋白L还结合单链可变片段（scFv）和含有κ轻链的Fab片段。当使用复杂的生物样品时，磁珠上专有的封闭剂可最大限度地减少或消除珠粒表面上的非特异性结合。
PuriMag G-Pro的特点:
l 高效率 – 与其它供应商的磁珠相当或更高的IP 靶抗原产量；
l 非特异性结合 – 稳定的预封闭磁珠可提供高度纯化的产物（例如，用抗体在 IP 中洗脱的抗原不含来自复杂细胞裂解物的污染蛋白）；
l 一致性 – 磁珠可消除树脂损失，与仅使用离心的传统 IP 方法相比，可实现更有效的分离；
l 用途广泛 – 多功能珠兼容手动和自动化工作流程。
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
ProA, ProG, ProL group
Binding capacity
>60 μg rabit IgG / mg Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10mg/mL in DI water, 0.05% NaN3，0.01% Tween 20，0.05% BSA
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
3.1 注意事项
请勿离心、干燥或冷冻 PuriMag G-ProA 珠子。离心、干燥或冷冻会导致微珠聚集并失去结合活性。为确保磁珠的良好分散以实现最佳抗体结合，重要的是在结合缓冲液中加入 0.025% 至 0.1% 的非离子（例如吐温-20 去污剂）或两性离子（例如 CHAPS）去污剂，并在孵育过程中混合磁珠。
为了最大限度地减少蛋白质降解，在制备细胞裂解物时加入蛋白酶抑制剂。
低pH洗脱可用于一次性应用。低pH洗脱的最佳时间为10分钟;超过 10 分钟可能导致非特异性结合和产量降低。
在下游蛋白质印迹应用中使用兔抗体（一抗或二抗）时，在室温下在SDS-PAGE样品缓冲液中进行洗脱。对于所有其他抗体种类，在SDS-PAGE样品缓冲液中煮沸微珠对于一次性应用是可以接受的。
注意：煮沸磁珠会导致磁珠聚集和失去结合活性。
PuriMag G-ProA 微球与小规模抗体纯化和免疫沉淀以及蛋白质印迹分析兼容。
在从不同来源血清中分离多克隆 IgG 时，请选择合适的蛋白磁珠。
3.2 纯化抗体流程
A. 缓冲液
Binding/Wash Buffer: Tris-buffered saline (50 mM Tris, 150 mM NaCl,Adjust pH with HCl to pH 7.6) containing 0.05% Tween-20
Elution Buffer: IgG elution buffer or 0.1M glycine, pH 2.0
Neutralization Buffer: High-ionic strength alkaline buffer such as a 1M phosphate or 1M Tris; pH 7.5-9
B. 纯化抗体（from Serum, Cell Culture Supernatant or Ascites）
注意：为确保均匀性，请在使用前通过反复倒置、轻轻涡旋或使用旋转平台彻底混合珠子。
1. 将 50μL （0.50mg） PuriMag G-ProA 微珠放入 1.5mL 微量离心管中。向珠子中加入 150μL 结合/洗涤缓冲液，轻轻涡旋混合。
2. 将试管放入磁性支架中，将珠子收集在试管侧面。取出并丢弃上清液。
3. 向试管中加入 1mL 结合/洗涤缓冲液。将试管倒置数次或轻轻涡旋混合 1 分钟。用磁架收集珠子，然后取出并丢弃上清液。
4. 用 490μL 结合/洗涤缓冲液稀释 10μL 样品。
注意：样品体积可根据用户喜好进行修改。如果样品体积< 500μL，则用结合/洗涤缓冲液将其稀释至最终体积 500μL。
5.将稀释后的样品加入装有预洗磁珠的试管中，轻轻涡旋或倒置混合。
6. 将样品在室温下孵育，混合 1 小时。
7.用磁性支架收集珠子，然后取出并弃去上清液。
8. 向试管中加入 500μL 结合/洗涤缓冲液，充分混合，用磁架收集珠子并弃去上清液。重复此洗涤两次。
9. 向试管中加入 100μL 洗脱缓冲液，充分混合并在室温下孵育 10 分钟，偶尔混合。
10.用磁架收集磁珠，然后保存含有洗脱抗体的上清液。要中和低pH值，每100μL洗脱液加入15μL中和缓冲液。
注意：推荐用于抗体纯化的磁珠最小体积为 50μL。
3.3 免疫共沉淀流程
Binding Buffer: Buffer used to prepare antigen sample
Wash Buffer: Tris-buffered saline (50 mM Tris, 150 mM NaCl, adjust pH with HCl to pH 7.6) containing 0.05% Tween-20
Neutralization Buffer: 1M Tris, pH 8.5
B. 免疫沉淀
注意：本实验方案是免疫沉淀的一般指南，每种应用都需要进行优化。
1. 将抗原样本与 5 - 10µg 的抗体混合。用细胞裂解缓冲液将反应体积调整至 500µL。在室温下混合孵育反应 1 - 2 小时，或在 4℃下过夜孵育。
2. 将 25µL（0.25mg）的 Pierce 蛋白 A 磁珠放入 1.5mL 微量离心管中。
3. 向磁珠中加入 175µL 洗涤缓冲液，轻轻涡旋混合。
4. 将离心管放入磁力架中，使磁珠聚集在管的一侧。移除并丢弃上清液。
5. 向管中加入 1mL 洗涤缓冲液。将管颠倒几次或轻轻涡旋混合 1 分钟。用磁力架收集磁珠。移除并丢弃上清液。
6. 将抗原样本 / 抗体混合物加入含有预洗磁珠的 1.5mL 微量离心管中，并在室温下混合孵育 1 小时。
7. 用磁力架收集磁珠，然后移除流出液并保存用于分析。
8. 向管中加入 500µL 洗涤缓冲液并轻轻混合。收集磁珠并丢弃上清液。重复洗涤两次。
9. 向管中加入 500µL 超纯水并轻轻混合。用磁力架收集磁珠并丢弃上清液。
磁珠客户发表的相关论文：
1. Chen Xiao-Li, et al. Direct Blood Culturing of Candida spp. on Solid Medium by a Rapid Enrichment Method with Magnetic Beads Coated with Recombinant Human Mannan-Binding Lectin, Journal of Clinical Microbiology, Volume 58, Issue 4, 2020, DOI: https://doi.org/10.1128/jcm.00057-20 （Homo-strep和蛋白A磁珠偶联抗体）
