细胞转染是将外源性分子如DNA,RNA等导入真核细胞内的专门技术,是研究基因表达调控、突变分析、基因沉默、蛋白质等的工具,目前已成为生物和医学等研究实验室广泛使用的基本技术。磁转染(Magnetofectio)是一种新颖、简单、高效的转染培养细胞的方法。它利用多聚阳离子进行表面修饰的磁性粒子作为载体携载基因,它们带有阳性电荷易于和有阴性电荷的DNA结合,并通过磁力将载体吸引到靶细胞,进而被靶细胞吸收。磁转染可使携载的基因在几分钟内富集在细胞表面,使得100%的细胞与显著的载体剂量接触。因而具有如下优势:
l 与标准转染相比,转染细胞百分比大大提高了转染率。
l 与短期孵育后的标准转染相比,转基因表达水平提高了数千倍。
l 极低的载体剂量可实现高转染率和高转基因表达水平,从而节省昂贵的转染试剂。
l 极短处理时间。与标准程序数小时比,用基因载体孵育细胞几分钟就足以产生高转染效率。
磁转染的使用方法极简单。最佳转染条件对于不同细胞系或细胞可能不同,需要通过优化确定最佳条件。优化后的条件可反复用于转染同一细胞系或细胞。要优化的条件包括:转染试剂与核酸或病毒的比例、核酸的量、细胞密度、孵育时间等。
1.产品特性
MagTransPoly是一种普遍适用的磁性颗粒制剂,用于高效核酸递送。 它与待转染的核酸以一步法混合,并已成功用于质粒DNA、反义寡核苷酸和siRNA。产品具有如下特性:
n 产品为褐色澄清水胶体,规格10ml(浓度1mg/ml);
n 表面 Zeta 电位:pH 7.4 约+40 mV ;
n 磁性:具有超顺磁性,饱和磁化强度约 60 emu/g ;
n 具有高的表面正电荷,因而具有高负载量及高转染效率,胶体稳定性好;
n 已采用 0.22 微米滤膜过滤除菌,在磁标板作用下易被细胞吞噬,可用于 DNA 或 RNA 的高效转染实验研究;
n 试剂盒中所有试剂请常温保存(20-25°C)。第一次使用后请储存于 4~8°C。常温运输。磁性纳米粒子勿冷冻,不要向储存液中加入任何其它试剂。
2.使用方法
以下说明已成功应用于各种细胞系的样品方案。 请注意,最佳条件因细胞系而异。 因此,可调整所用DNA或RNA的量以及各个组分的比例以获得最佳结果。 以下建议可用作指导,以最短的孵育时间实现良好的转染。