简介
PuriMag Si-X磁珠是涂有离子交换表面（X）的磁性硅纳米颗粒。磁珠适用于：
● 质谱分析（例如MALDI-TOF分析）和HPLC之前的样品制备和预分级
● 用于多种下游应用的蛋白质和肽分离，例如酶测定
● 去除洗涤剂
● 临床样本的分级，例如血清，血浆，组织，脑脊液，尿液和细胞裂解液
PuriMag Si-X磁珠可方便用于手动和自动化工作流程。在外磁场作用下，高磁强度的磁珠通常在1分钟内完全收集。快速和完全分离导致非常好的再现性，因为在洗涤步骤不会损失磁珠。此外，与基于柱子的离子交换色谱相比，蛋白质吸附、解吸和磁性收集的短暂孵育时间通常显著缩短，如HPLC。PuriMag Si-X磁珠适用于自动液体处理平台上的96孔微孔板。
产品名称
PuriMag Si-X
浓度
10mg / ml
平均尺寸
0.3~0.4μm
材料
硅基磁性材料
磁分离
<30 S
储存
无水乙醇中（2-8℃）
II．产品
本公司硅基离子交换磁珠产品主要包括强阳离子（SCX）、强阴离子（SAX）、弱阳离子（WCX）、弱阴离子（WAX）、PSA、DEAE六种，其基本特性如下表：
>40 µg protein / mg of Beads
Name: PuriMag-Si-PSA
Cat: PMPro013
Name: PuriMag-Si-WCX
Cat: PMPro009
Name: PuriMag-Si-WAX
Cat: PMPro008
Name: PuriMag-Si-SCX
Cat: PMPro015
Name: PuriMag-Si-SAX
Cat: PMPro014
Name: PuriMag-Si-DEAE
Cat: PMPro016
注意：设计用于蛋白质纯化的通用方案非常困难。 以下方案是用于部分蛋白质和/或肽与 PuriMag Si-X 磁珠混合的示例。 用户可以使用替代的结合、洗涤和洗脱缓冲液。 为了获得最佳结果，用户可根据故障排除部分的描述来确定最佳工作条件。 我们建议进行条件优化用于每个单独应用的磁珠数量。 洗脱体积可相应调整以避免不必要的样品稀释。
A. 选择合适的离子交换磁珠
带电荷的蛋白质和/或肽将与带相反电荷的基质结合。
如果目标蛋白和/或肽的 pI（等电点）低于缓冲液的 pH 值，则选择阴离子交换磁珠（DEAE 、PSA、WAX（弱阴离子交换）和 SAX (强阴离子交换）磁珠）。 如果目标蛋白和/或肽的 pI 高于缓冲液的 pH 值，则应选择阳离子交换磁珠，例如 WCX（弱阳离子交换）磁珠和 SCX（强阳离子交换）磁珠。
B. 选择合适的缓冲液
结合/洗涤缓冲液：结合/洗涤缓冲液的 pH 值应与目标蛋白或肽的 pI 至少相差一个 pH 单位。
洗脱缓冲液：为了从磁珠上洗脱目标蛋白或肽，用户应通过逐步洗脱优化洗脱条件，使用盐浓度增加的溶液或改变洗脱缓冲液的 pH。
III．对应缓冲体系
肽/蛋白质与PuriMag Si-X磁珠表面上的离子基团结合，同时洗去杂质。在解吸缓冲液中洗脱后，纯化的肽和蛋白质可供下游使用。
1）弱阳离子交换磁珠PuriMag Si-WCX对应缓冲液
● 预平衡溶液：0.05 M Ammonium Acetate（AmAc）， pH 4，1M NaCl
● 吸附缓冲溶液：0.05 M Ammonium Acetate， pH 4
● 洗涤液：水（HPLC级）
● MALDI MS的解吸溶液1： 1% TFA水溶液
解吸溶液2： a) 0.05 M AmAc，pH 4，0.2 M NaCl
b) 0.05 M AmAc，pH 4，0.4 M NaCl
c) 0.05 M AmAc，pH 4，0.6 M NaCl
d) 0.05 M AmAc，pH 4，0.8 M NaCl
e) 0.05 M AmAc，pH 4，1 M NaCl
对于缓冲系统，应考虑目标分子的pI。为有效吸附和解吸，吸附和解吸缓冲液的pH应至少比要结合的分子的pI低1个pH单位，但不应超过4个pH单位。
为分析体液如血清，建议在不同pH下测试其它缓冲系统，因为目标分子的pI是未知的。可选吸附缓冲液：
● 50 mM Sodium citrate, pH 5 (with increasing NaCl concentrations as for the AmAc system)
● 50 mM MES, pH 6
● 50 mM sodium phosphate pH
● 50 mM HEPES pH 8
为了更好地处理，可使用0.01%吐温20或0.01%TX100的洗涤剂。但请注意，清洁剂可能会干扰质谱等下游应用。推荐使用高达8mM的正辛基葡糖苷（n-octylglucoside）进行血清分析。
2）弱阴离子交换磁珠PuriMag Si-WAX对应缓冲液
● 预平衡溶液： 0.02 M bis Tris，pH 6，1M NaCl
● 吸附溶液：0.02 M bis Tris，pH 6
解吸溶液2： a）0.02 M bis Tris，pH 6，0.05 M NaCl
b）0.02M bis Tris，pH6，0.1M NaCl
c）0.02M bis Tris，pH6，0.15M NaCl
d）0.02 M bis Tris，pH 6，0.20 M NaCl
e）0.02M bis Tris，pH6，0.25M NaCl
● 0.1%TFA（pH <3.0）
● 柠檬酸钠缓冲液，pH 3.5-4.5
● N-甲基哌嗪，20mM，pH 4.5-5.0
● 哌嗪，20 mM，pH 5.0-6.0
● bis Tris，20 mM，pH 5.8-6.4
● 双Tris丙烷，20 mM，pH 6.4-7.3
● 三乙醇胺，20mM，pH 7.3-7.7
对于解吸溶液（盐梯度洗脱），须加入0.05M、0.1M、0.15M、0.2M和0.25M NaCl，如上面的Tris缓冲液。
3）强阳离子交换磁珠PuriMag Si-SCX对应缓冲液
● 预平衡溶液：50 mM Sodium acetate, pH 5.0, 1M NaCl
● 吸附溶液：50 mM Sodium acetate, pH 5.0, 20 mM NaCl
解吸溶液2： 50 mM Sodium phosphate, pH 8.0, 0.05-1.0 M NaCl
或改变洗脱液pH (如 50 mM lactic acid buffer pH followed by 4.0, then 50 mM acetic acid pH 5.0 , then 50 mM MES pH 6.0, then 50 mM sodium phosphate buffer pH 7.0, then 50 mM HEPES pH 8.0, and then 20 mM ammonium acetate pH 9.5).
4）强阴离子交换磁珠PuriMag Si- PSA、DEAE、SAX对应缓冲液
● 预平衡溶液：50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 1M NaCl
● 吸附溶液：50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 20 mM NaCl
解吸溶液2： 50 mM Sodium phosphate pH 8.0, 0.1-1.0 M NaCl
或改变洗脱液pH (如 20 mM bis-Tris pH 7.0, followed by 20 mM, followed by 20 mM L-Histidine pH 6.0, then 20 mM Piperazine pH 5.0 and 50 mM Sodium Citrate buffer pH 4.0);
IV. 实验使用流程
1）预平衡磁珠：涡旋PuriMag Si-X磁珠均匀悬浮，将10μl磁珠悬浮液转移至PCR管，磁分离去除上清。从磁铁上取下管子，加入50μl预平衡溶液并重新悬浮，磁分离弃上清，重复洗涤两次。
2）吸附缓冲液平衡磁珠：向磁珠中加入50μl吸附缓冲液，并重新悬浮磁珠，磁分离弃上清。吸附缓冲液重复洗涤两次。
3）蛋白质/肽的吸附：向洗涤过的磁珠中加入含大约2μg蛋白质或肽的样品，吸附溶液总体积20μl。在室温下轻轻摇动磁珠5分钟完成吸附，磁分离弃上清。加入20μl吸附液，洗涤磁珠，弃去上清液。重复洗涤三次。
4）解吸：
A）MS分析的解吸：向磁珠中加入50μl洗涤液并重悬（脱盐步骤），磁分离，弃上清液。向磁珠中加入10μl解吸附溶液1，重新悬浮，磁分离，取出液体至Eppendorf管进行进一步分析。
MALDI分析：通常，将1μl洗脱液和1μl适当MALDI-MS基质的饱和溶液混合（typically, alphacyano-4-hydroxy-cinnamic acid is used for peptides 4000 Da, sinapinic acid is used.）。在MALDI靶上点样1μl混合物产生可靠的光谱。
B） 在天然蛋白质条件下的解吸：将磁珠重新悬浮在10μl解吸附溶液2a （0.05M AmAc, pH 4, 0.2 M NaCl）中。并在室温下孵育2分钟，磁分离并转移上清液。增加解吸溶液2的盐浓度b-e，该解析步。
5）4B步骤后的脱盐：如果在天然条件下解吸后需脱盐（4B），例如，对于质谱分析，推荐PuriMag的蛋白质组学C3、C8或C18磁珠。
本产品仅供科研使用!
