1. 概述
PuriMagTM G-SH巯基功能化磁性纳米粒子是均一的、聚合物包覆的超顺磁纳米粒，亲水表面确保磁珠在各种缓冲液中具有出色的分散性、低非特异吸附和易操作性。巯基是一种官能团，含有与氢原子相连的硫原子，常以后缀"-thiol" 和前缀 "mercapto-" 或 "sulfanyl."表示，硫醇对软金属有强烈的偏好。巯基磁珠专门设计用于偶联SMCC（磺基琥珀酰亚胺基 4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-羧酸酯）修饰的蛋白质/肽。SMCC 包含一个胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺（NHS酯）和巯基反应性马来酰亚胺基团。NHS酯类与伯胺发生反应在pH 7-9下形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺在pH 6.5-7.5下与巯基反应，形成稳定的硫醚键。这样品制备过程快速直接，无需费力的重复移液和离心。PuriMagTM G-SH巯基磁珠是偶联大蛋白或小肽的理想选择。PuriMagTM G-SH磁珠适用于各种磁分离应用，包括亲和力富集、蛋白质纯化、免疫沉淀和细胞分选。
特点和优点：
w 偶联条件：pH7.2、12 h 偶联较高效；
w 稳定的共价键和低水平的配体泄漏；
w 产生可重复使用的免疫亲和基质；
w 低非特异性结合；
w 应用：抗体、蛋白质/肽、DNA / RNA的纯化；细胞分选；免疫沉淀；
w 偶联方便快速；
w
偶联示意图：
2. 产品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Sulfhydryl group
Group density
~300 µmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是将将蛋白质和/或肽偶联至PuriMagTM巯基活化磁性纳米粒子的示例。
强烈建议针对具体样本优化磁珠用量。如配体负载太低，则可能导致非特异结合。如配体负载过高，可能会导致空间位阻。建议每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽来制成亲和基质。该方案可相应地按比例放大和缩小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手动操作）：用于容纳12个单独的1.5~2ml离心管（Mrack02）；用于容纳2个50 ml离心管或2个15 ml离心管（目录号Mrack03）
2）偶联缓冲液：PBS, PH 7.2； SMCC (Sulfosuccinimidyl 4-[N-maleimidomethyl]cyclohexane-1-carboxylate) or Sulfo-SMCC ；
B. 蛋白质/肽制备：
1. 用 50 倍体积的 PBS（pH 7.2, 5mM EDTA）透析蛋白质/肽。
2. 在蛋白溶液中加入适量SMCC，混合均匀。
注意：制备SMCC溶液（3.7mg/ml的DMF溶液。如果 SMCC 没有完全溶解，请将试管放入 50°C 的水中泡几分钟。将 100 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白质溶液 （10mg/ml） 中。或将 50 ul SMCC 溶液加入 1 ml 蛋白质溶液（<1mg/ml）。
3. 在 + 4°C 下孵育 2 小时或室温孵育 30 分钟。
4. 去除 Sephadex G15 色谱柱上的游离 SMCC 和未修饰的蛋白质。用PBS缓冲液洗脱。蛋白质SMCC的洗脱可以用分光光度计在206nm处监测。
C．磁珠制备：
注意：称重，用PBS（浓度：10mg/ml）悬浮磁珠，通过剧烈涡旋分散磁珠，然后在 4°C 下储存。在完全使用之前摇晃瓶子以重悬磁珠。
1. 摇晃瓶子，彻底重悬巯基磁珠。
2. 将 100μl珠子 （10 mg/ml） 转移到试管中。将试管放在磁架上 1-3 分钟。移除上清液，而试管留在架子上。
3. 取出试管，用200μlPBS缓冲液彻底重悬珠子。将试管在室温下放置 2-3分钟。将试管放在磁架上 1-3 分钟。当试管留在架子上时取出上清液。
4. 重复步骤 3 两次。
5. 将磁珠与 1 ml DTT（二硫苏糖醇 3 mg/ml）在室温下孵育 15 分钟，然后用PBS缓冲液洗涤磁珠3次。
6. 将还原的磁珠与蛋白质-SMCC 偶联物混合，并在 +4°C 下孵育 12 小时。
7. 清洗磁珠并将它们重悬于所需的缓冲液中。
（本磁珠仅供科研使用！）
